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Shanghai Model Organisms Center, Inc.
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上海南方模式生物科技股份有限公司
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文献和实验KO鼠、Cre鼠、Flox鼠有什么区别?一篇理清常见基因工程小鼠
做基因功能研究时,经常会看到 KO 鼠、Cre 鼠、Flox 鼠、Cre+;Flox/Flox 鼠等不同基因型。它们看起来都和“基因敲除”有关,实际代表的并不是同一个概念。 简单来说,KO 描述的是目标基因已经发生功能缺失;Cre 鼠提供 Cre 重组酶;Flox 鼠则是在目标基因关键区域两侧预先插入 loxP 位点。Cre 与 Flox 配合后,可以实现组织特异性或时间特异性的条件性基因敲除。 一、KO鼠:目标基因已经发生功能缺失 KO,即 Knockout,指基因
。随后,才能进行杂合子小鼠的相互交配。注意点:-不同的 KO Founder 之间不能相互交配。-不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。条件性基因敲除获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→ f/f;Cre+Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织
拿到KO、Flox、Cre或CRISPR编辑小鼠后,后续实验能不能顺利开展,一个重要前提是繁育方案的设计。配繁组合不合理,可能连续几窝都拿不到目标基因型;PCR只看一条阳性带,也可能把杂合、纯合甚至错误编辑的动物混进正式实验。 在开始繁育前,先把将最终实验鼠和对照鼠的完整基因型写出来,再倒推每一代需要什么亲本。 一、不同模型的配繁思路 1. 常规KO小鼠 如果杂合子记作+/−,常见配繁方式为: 以上比例建立在等位基因正常孟德尔遗传、不同基因型均能存活的前提下。如果纯合
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