禽流感NP蛋白（杆状病毒）

【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？

不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。 我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大家讨论一下。 下面是我的实验过程，请高手指教，同时希望也给新手一个指导

反应器细胞悬浮培养和微载体培养技术在动物疫苗生产中的应用

12周时间[9]，发生突发疫情时，将细胞库中冻存的细胞复苏，细胞快速增殖进入规模化生产疫苗，在生物安全三级环境下可以直接应用野毒流行株进行疫苗生产。现已发现MDCK、Vero等细胞对禽流感或流感病毒敏感，经过工艺优化，病毒滴度或HA效价并不低于鸡胚。同时，反应器细胞培养工艺生产流感疫苗的安全性和有效性，已有多种流感疫苗被美国FDA和欧洲EMEA批准上市（表2）[12-14]。细胞培养生产线自动化程度高，更容易疫苗的质量控制。如，流水线管道化无菌生产、无外源因子污染；无卵清蛋白、易于纯化；产品批间

禽流感

体，容易引起世界性大流行。由于病毒多变异，导致甲型流感反复发生，难以彻底根除。 结构、形状和化学组成 　　禽流感病毒基因组由8个负链的单链RNA片段组成。这8个片段编码10个病毒蛋白，其中8个是病毒粒子的组成成分(HA、NA、NP、M1、M2、PB1、PB2和PA)，另两个是分子质量最小的RNA片段，编码两个非结构蛋白——NS1和NS2。NS1与胞浆包含体有关，但对NS1和NS2的功能目前尚不清楚。现在已经获得了包括H3、H5和H7在内的几个禽流感病毒亚型HA基因的全部序列