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流式细胞周期检测
细胞周期(Cell Cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。
实验原理:
碘化丙啶(Propidium,PI)是一种双链DNA的荧光染料。PI与双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA的分布情况进行细胞周期分析。
服务内容:
1)客户提供细胞,细胞培养,细胞周期同步化;
2)细胞进行处理,收集细胞,乙醇固定;
3)PI染色,上机样本制备,流式上机检测,数据分析。
交付标准:
实验原始数据、图片、分析结果;
详细的实验流程及完整报告一份。
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文献和实验:做流式细胞时,PI 染色,PI的浓度应该是多少?还有就是400目的筛网是什么?不用可以吗?谢谢。 A:100ug/ml,一般用400目的筛网是用来将粘在一起的细胞团滤掉的,否则会出现人为的多倍体干扰,分析的时候需要的是单个的细胞,不过如果经验丰富也可以gate掉的。如果你没有条件,建议在染色之前将细胞弹的很散,再进行染色 10、Q:流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备? A:给你介绍一下我的实验方法,我做的是周期检测,要做平行样,六孔板做的。 (1)收集先弃液,将你要实验(你已经处理
量为35~36kD的Ca2 +依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 2、Q:用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊??tunel测出来的细胞凋亡率大概有30%而作流式测出来的凋亡率只有2%(阴性
脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 2. Q:用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊? A:tunel测出来的细胞凋亡率大概有30%而作流式测出来的凋亡率只有2%(阴性对照0.5%)差别好大啊,用的是beckman公司的Annexin V /PI双染试剂盒,实验步骤如下:
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