IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家
英文名：IRF1 GFP Reporter Plasmid
品牌：百奥莱博
规格：1μg
IRF1-GFP报告基因是用于检测IRF1转录活性水平为目的的报告基因。IRF1(Interferon Regulatory Factor 1)是IRF家族中最早被发现的核转录因子，具有广泛的生物学功能，它可以调节干扰素系统，抑制细胞生长，抑制肿瘤形成。

IRF1-GFP报告基因主要用于检测细胞中的Interferon Regulation信号通路、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMIRF1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个IRF1结合位点，可以高效地检测IRF1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得IRF1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM IRF1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMIRF1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

欲咨询购买IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·热启动高保真酶
编号：SY0038
英文名称：HotStart Pfu DNA Polymerase
规格：100U
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR，扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52，是Pfu酶的1/6；且扩增速度可以达到15秒/kb。

本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品组份：
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃

质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

使用方法：
1. 所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。

 

ddH2O	to 50 μl
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4)	10 μl
d25 mM MgSO4a	optional
ddNTP Mix(10 mM each)b	1 μl
dDMSOc	optional
d5×PCR Enhancerd	optional
d模板DNAe	optional
dForward Primer(10 μM)	2μl
dReverse Primer(10 μM)	2 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f	1 μl

【注】：
a. 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

模板种类/扩增长度	＜1 kb	1 kb～10 kb	＞10 kb
基因组DNA	50 ng～250 ng	100 ng～300 ng	150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA	10 pg～20 ng	10 pg～20 ng	1 ng～30 ng
cDNA	1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)

f. 推荐的酶的终浓度为1U/50 μl反应。然而，根据扩增子的长度和复杂程度不同，可将HS Pfu DNA Polymerase在0.5-2U/50 μl反应之间进行优化。但请勿超过2U/50 μl，尤其当扩增子长度大于5 kb时。HS Pfu DNA Polymerase具有较强的校对活性。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。

2. 推荐PCR反应条件：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec～3 min	1
变性b	95℃	5～10 sec	25～35循环
退火c	45℃～72℃	10～30 sec
延伸d	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

【注】：
a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃，时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. HS Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组
cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。

3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*适当提高酶量，但50μl反应体系内不要超过2 U；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～6%；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	92℃	2 min	1
变性	92℃	5～10 sec	25～35循环
延伸	68℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	68℃	5～10 min	1

4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～8%；
*添加5×PCR Enhancer；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	25～35循环
退火	45℃～72℃	10～30sec
延伸	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

引物设计注意事项:
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


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·BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
编号：SY0298
英文名称：BCA Protein Quantification Kit
规格：500T
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μl）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μl）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。


产品特点

1)灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/ml。
2)速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广，20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项
1)使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2)低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3)实验操作规范，提高上样量的精确度。
4)每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

操作方法

一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。
 

Vial	稀释液体积(μl)	2mg/ml BSA体积(μl)	BSA终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	125	75	750
E	150	50	500
F	350	50	250
G	375	25	125
H	395	5	25
I	400	0	0=Blank
表一BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/ml）*

*如用比色皿检测，每管需加100μl标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μl。

2. 配制BCA工作液

1)计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
注：比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

2)配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1） ，充分混匀。
注：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。

二、检测方法

1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1)各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入2.0ml BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。
注意：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。
注意：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1)各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
注：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μl标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。

2)每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3)冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。

注意：
a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。
b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

附录：
表：BCA蛋白浓度测定的兼容性

名称	耐受浓度
Sodium bicarbonate	100 mM
Sodium phosphate	25 mM
2-Mercaptoethanol	0.01%
Glycercol (pure)	10%
Glycine-HCl, pH 2.8	100 mM
HEPES	100 mM
Hydrochloric acid	100 mM
Leupeptin	10 mg/L
Nickel chloride (in TBS, pH8.0)	10 mM
Nonidet P-40 (NP-40)	5% (w/v)
Octyl β -glucoside	5% (w/v)
Potassium thiocyanate	3.0 M
SDS	5%
Sodium acetate, pH 4.8	200 mM
Sodium azide	0.20%
Sodium hydroxide	100 mM
Sucrose	40%
Triton X-100	5%
Triton X-114, X-305,X-405	1%
Tween-20, Tween-60, Tween-80	5%
Zwittergent	1%
ACES, pH 7.8	25 mM
Acetone	10%
Acetonitrile	10%
Ammonium sulfate	1.5 mM
Aprotinin	10 mg/L
Bicine, pH 8.4	20 Mm
Bis-Tris, pH 6.5	33 mM
Borate, pH 8.5	50 mM
Brij-35	5%
Brij-52	1%
Brij-56, Brij-58	1%
BugBuster protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Calcium chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
CelLytic B Reagent	no interference (undiluted)
Cesium bicarbonate	100 mM
CHAPS	5%
Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0)	0.8 mM
CytoBuster Protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Deoxycholic acid	5%
Dithioerythritol (DTE)	1 mM
Dithiothreitol (DTT)	1 mM
DMF	10%
DMSO	10%
EDTA	10 mM
EPPS, pH 8.0	100 mM
Ethanol	10%
Ferric chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
Glucose	10 mM
Glycerol	10%
Guanidine-HCl	4 M
Imidazole, pH 7.0	50 mM
MES, PH6.1	100mM
Methanol	10%
MOPS, pH7.2	100mM
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2	10mM
Octyl β- thioglucpyranoside	5%
PIPES, pH6.8	100mM
PMSF	1 mM
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092)	no interference (undiluted)
Reportasol Extraction Buffer	no interference (undiluted)
Sodium chloride	1 M
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4	200 mM
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2	1mM
Span 20	1%
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0)	no interference (undiluted)
Thimerosal	0.01%
TLCK	0.1mg/L
TPCK	0.1mg/L
Tricine, pH 8.0	25 mM
Triethanolamine, pH 7.8	25 mM
Tris	250 mM
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP)	1 mM
Urea	3M
Zinc chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM

IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家关键词：IRF1 GFP Reporter Plasmid,SY0171,IRF1-GFP报告基因质粒

BTN130509 磁珠血液DNAOUT MAG Blood DNAOUT
NF-210 羊抗人C4血清
ARB10969 人免疫球蛋白G Fc段受体I(FcγRI/CD64)血清中含量检测 Human receptorifor the fc region of immunoglobulin g,fcγri ELISA KIT
TEN缓冲液(1×,pH8.0)   500ml
F030435 胶体金标记山羊抗鸡IgY IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Chicken IgY(IgG)*GOLD
ARB14193 山羊蛋白聚糖(PG)酶免分析 
PY01-140  蚕蛹蛋白胨  250克  
NF-204 羊抗人Alb血清
己糖激酶 Sepharose CL-4B 9001-51-8
9000-70-8 明胶 Gelatin
F030639 FITC标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*FITC
硫*(代"酸")葡聚糖 Sodium iodide 9011-18-1
硫*(代"酸")链霉素溶液(10mg/ml) Streptomycin 10mg/ml 10ml
碳酸铈 HEPPSO sodiu*(代"m") salt 54451-25-1

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