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IRF1 GFP Reporter Plasmid
长期
北京百奥莱博科技有限公司
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家
英文名:IRF1 GFP Reporter Plasmid
品牌:百奥莱博
规格:1μg
IRF1-GFP报告基因是用于检测IRF1转录活性水平为目的的报告基因。IRF1(Interferon Regulatory Factor 1)是IRF家族中最早被发现的核转录因子,具有广泛的生物学功能,它可以调节干扰素系统,抑制细胞生长,抑制肿瘤形成。
IRF1-GFP报告基因主要用于检测细胞中的Interferon Regulation信号通路、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMIRF1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个IRF1结合位点,可以高效地检测IRF1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因,更便于后续的检测。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得IRF1-GFP报告基因更易于转染。
质粒图谱
pGM IRF1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’
使用说明
pGMIRF1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。
注意事项
1)本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
欲咨询购买IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·热启动高保真酶
编号:SY0038
英文名称:HotStart Pfu DNA Polymerase
规格:100U
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体,可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR,扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的,新一代超保真DNA聚合酶,具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性,可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升,即使是非常复杂的模板,也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52,是Pfu酶的1/6;且扩增速度可以达到15秒/kb。
本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM),可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外,产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组份:
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4):1.25 ml
25 mM MgSO4:1 ml
dNTP Mix(10 mM each):100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl):100 μl
5×PCR Enhancer:500 μl
DMSO:100 μl
10×Loading buffer:1.25 ml
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃ 30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
储存条件:-20℃
质量控制:
核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,加入2U本品,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测1:50 μl PCR体系中加入1U本品,以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2:50 μl PCR体系中加入1U本品,以10 ng λDNA为模板扩增30个循环,取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的15 kb条带。
使用方法:
1. 所有操作请在冰上进行,各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物,请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。
ddH2O | to 50 μl |
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4) | 10 μl |
d25 mM MgSO4a | optional |
ddNTP Mix(10 mM each)b | 1 μl |
dDMSOc | optional |
d5×PCR Enhancerd | optional |
d模板DNAe | optional |
dForward Primer(10 μM) | 2μl |
dReverse Primer(10 μM) | 2 μl |
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f | 1 μl |
模板种类/扩增长度 | <1 kb | 1 kb~10 kb | >10 kb |
基因组DNA | 50 ng~250 ng | 100 ng~300 ng | 150 ng~400 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg~20 ng | 10 pg~20 ng | 1 ng~30 ng |
cDNA | 1~5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10) |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性a | 95℃ | 30 sec~3 min | 1 |
变性b | 95℃ | 5~10 sec | 25~35循环 |
退火c | 45℃~72℃ | 10~30 sec | |
延伸d | 72℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 72℃ | 5~10 min | 1 |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 92℃ | 2 min | 1 |
变性 | 92℃ | 5~10 sec | 25~35循环 |
延伸 | 68℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 68℃ | 5~10 min | 1 |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 25~35循环 |
退火 | 45℃~72℃ | 10~30sec | |
延伸 | 72℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 72℃ | 5~10 min | 1 |
Vial | 稀释液体积(μl) | 2mg/ml BSA体积(μl) | BSA终浓度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml)* |
名称 | 耐受浓度 |
Sodium bicarbonate | 100 mM |
Sodium phosphate | 25 mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol (pure) | 10% |
Glycine-HCl, pH 2.8 | 100 mM |
HEPES | 100 mM |
Hydrochloric acid | 100 mM |
Leupeptin | 10 mg/L |
Nickel chloride (in TBS, pH8.0) | 10 mM |
Nonidet P-40 (NP-40) | 5% (w/v) |
Octyl β -glucoside | 5% (w/v) |
Potassium thiocyanate |
3.0 M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH 4.8 | 200 mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100 mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH 7.8 | 25 mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5 mM |
Aprotinin | 10 mg/L |
Bicine, pH 8.4 | 20 Mm |
Bis-Tris, pH 6.5 | 33 mM |
Borate, pH 8.5 | 50 mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent |
no interference (undiluted) |
Calcium chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
CelLytic B Reagent | no interference (undiluted) |
Cesium bicarbonate | 100 mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0) | 0.8 mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent |
no interference (undiluted) |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol (DTE) | 1 mM |
Dithiothreitol (DTT) | 1 mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10 mM |
EPPS, pH 8.0 | 100 mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
Glucose | 10 mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4 M |
Imidazole, pH 7.0 | 50 mM |
MES, PH6.1 |
100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β- thioglucpyranoside |
5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1 mM |
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) | no interference (undiluted) |
Reportasol Extraction Buffer | no interference (undiluted) |
Sodium chloride | 1 M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200 mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0) | no interference (undiluted) |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH 8.0 | 25 mM |
Triethanolamine, pH 7.8 | 25 mM |
Tris | 250 mM |
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP) | 1 mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
北京百莱博科技有限公司专业生产报告基因检测产品,欢迎来电咨询选购IRF1-GFP报告基因质粒北京厂家。
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