超敏型BCA法蛋白定量试剂盒

特别提示：包括超敏型BCA法蛋白定量试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超敏型BCA法蛋白定量试剂盒
英文名称：Hypersensitive BCA Protein Assay Kit
产品规格：500次

本产品是在BCA法蛋白定量试剂盒(BTN80815)基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒，尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。

产品特点：
1．超敏感，最低检测浓度为0.5μg/mL。
2．线性范围在 0.5～20μg/mL，尤其适用于低浓度的样品。
3．对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。
4．比 Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
5．试剂稳定，室温可以放置两年，工作液1 天内有效。
6．终产物稳定，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．最短可以检测双肽，所以适合于分子量较小的蛋白质，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	250ml
溶液B	250ml
溶液C	10ml
BSA标准品(2mg/mL)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：(96板操作模式)
1．将本试剂盒提供的BSA标准品用自备的样品缓冲液稀释成浓度为0.04μg/uL的工作液待用(一次测试所需BSA标准品工作液的用量参见下表)。
2．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA工作液、待测样品和样品缓冲液：

编号	BSA工作液 (μL)	待测样品 (μL)	样品缓冲液 (μL)	总体积 (μL)	蛋白含量 (μg)
0	0	0	150	150	0
1	5	0	145	150	0.2
2	10	0	140	150	0.4
3	20	0	130	150	0.8
4	40	0	110	150	1.6
5	60	0	90	150	2.4
6	80	0	70	150	3.2
7	100	0	50	150	4.0
样品1	0	?μl	补到150	150	未知
样品N	0	?μl	补到150	150	未知

3．计算 BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.15mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量。
4．配制 BCA工作液：先将溶液A、溶液B和溶液C按50：48：2的比例混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A + 4.8mL溶液B + 200μL溶液C。
5．将1倍体积(即150μL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
6．60℃放置1小时。
7．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，光吸收值会慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
8．在 562nm下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
9．将编号为0 号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
10．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以上一步得到的这几个样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
11．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位：μg/uL)。

注意事项：
1．加工作液后也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育60分钟。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：

名称	在此浓度下不受影响
Ammonium Sulfate	1.5 M
Brij-35	5.0%
CHAPS	5.0%
EDTA	10mM
Hepes	100mM
Glycine，pH2.8	100mM
Guanidine HCl	4.0 M
Tween 20、60、80	5.0%
SDS	5.0%
Sodium Acetate pH5.5	200mM
Sodium Chloride(NaCl)	1.0 M
Sucrose	40%
Sodium Hydroxide(NaOH)	0.1 M
NP-40	5.0%
Triton X-100	5.0%
Urea	3.0 M

4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何 EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
5．本试剂受温度和时间影响较大，故需要准确定时和定温，以保证精确定量。