Ad-mCherry-GFP-LC3B

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北京百奥莱博专业生产供应Ad-mCherry-GFP-LC3B，我公司销售全品类的细胞生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

产地：国产|进口
英文名：adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
规格：1ml|10×1ml
编号：YT160
品牌：百奥莱博

Ad-mCherry-GFP-LC3是一种可以表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme), 以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。
自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下, 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料, 促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
Ad-mCherry-GFP-LC3B是我公司自行研发的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达红色荧光蛋白mCherry、绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的红色和绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。
自噬小体在与溶酶体融合过程中，溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭，这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度。mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白，当其与GFP进行LC3B的共同标记时，在GFP被溶酶体酸性环境所淬灭的情况下，可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此，通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白，可以非常有效地追踪自噬过程。在用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B以弥散的黄色荧光(mCherry和GFP的综合效果)形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以黄色斑点的形式表现出来(LC3B dot or punctae)；当自噬体与溶酶体融合后，因GFP荧光的部分淬灭而以红色斑点的形式表现出来。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
我公司的Ad-mCherry-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108 pfu/ml进行计算。如果按照2 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染100个孔；如果按照2 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染500个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少。
保存条件：
-80℃保存，一年有效。-20度保存，1-2个月内有效。4℃保存，一周内有效。
注意事项：
反复冻融会降低病毒滴度，如有必要请在收到本产品后分装保存。病毒融解后，如果在一周内使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年，可能会导致滴度下降，此时建议重新测定病毒滴度。
腺病毒感染需要细胞表面的CAR受体，请确认拟使用的细胞或组织可以被腺病毒感染。
本产品使用前请仔细阅读附录1《腺病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1)，没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults)，可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

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·EMSA探针-PPAR(1.75μM)
编号：YT243
规格：60μl

EMSA探针－PPAR是用于EMSA(也称gel shift)研究的PPAR consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的PPAR结合位点，即PPARα、PPARβ和PPARγ三种转录因子的共同的结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。
PPAR consensus oligo的序列如下：
5"-CAA AAC TAG GTC AAA GGT CA-3"
3"-GTT TTG ATC CAG TTT CCA GT-5"
本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。
一个包装的探针可以进行约30个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行20个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争(cold competition)，可以进行30-60个冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。



Ad-mCherry-GFP-LC3B关键词：Ad-mCherry-GFP-LC3B,YT160,百奥莱博

·Tubulin抗体
编号：YT156
英文名称：Tubulin antibody
规格：>40次

本Tubulin抗体为进口分装，用纯化的微管蛋白作为抗原制备而成的抗Tubulin小鼠单克隆抗体。克隆号为B-5-1-2。本Tubulin抗体识别α-tubulin的C-terminal。
Tubulin即微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-tubulin和β-tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种tubulin。α-tubulin和β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照。也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。
本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测40次。
保存条件：
Tubulin抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。



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·EMSA探针-SP1(10μM)
编号：YT249
规格：30μl

EMSA探针－SP1是用于EMSA(也称gel shift)研究的SP1 consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的SP1结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。
SP1 consensus oligo的序列如下：
5"-ATT CGA TCG GGG CGG GGC GAG C-3"
3"-TAA GCT AGC CCC GCC CCG CTC G-5"
本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。
一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争(cold competition)，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。

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