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-80℃
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6~12 个月
- 英文名:
rAAV-CaMKIIα-hM3D(Gq)-EGFP
- 供应商:
枢密科技
- 规格:
滴度≥2.00E+12 vg/mL,5ul
化学遗传学技术/DREADDS 技术可以用来调控神经元或其他类型细胞的活动。例如将病毒注射到小鼠的特定脑区,hM3D(Gq)在小鼠中表达后,通过腹腔注射或饮食等方式给CNO(clozapine-N-oxide),可以实现长时间范围(小时量级)的对神经元的激活。
名称释义:
rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少被免疫系统所清除),表达时间长。
CaMKIIα:Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II,兴奋性神经元启动子。
hM3D(Gq):hM3D(Gq)是从人毒蕈碱乙酰胆碱受体M3 上改造的仅对CNO(clozapine-N-oxide)有反应的人工受体(designer receptors exclusively activated by designer drugs,DREADD),不再受乙酰胆碱激活。在一些神经元里,CNO 结合hM3D 后,激活Gq 蛋白偶联的磷酸酶PLCβ,引起PIP2被降解,从而使得被PIP2 关闭的KCNQ 外向钾离子通道被打开,以至于细胞膜去极化,形成动作电位,即激活神经元。在KCNQ 或是Gq 不表达的神经元里,hM3D 的功能可能会有所不同。
EGFP:绿色荧光蛋白,激发波长488nm,发射波长507nm。
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文献和实验DREADDs技术。 图1.化学遗传学技术1. DREADDs技术DREADDs技术是由Bryan L. Roth等人发明的,他们改变了G蛋白偶联受体—乙酰胆碱受体的结构,改变后其只能被特定的化合物Clozapine-N-oxide(CNO)激活或者抑制。此类改变的受体会选择性地作用于不同的GPCR级联反应,包括Gq、Gi、Gs、Golf和β-arrestin,其中应用最广泛的是Gq-DREADD和Gi-DREADD。通过将上述受体在细胞内表达,在CNO的作用下,其产生的结果各不相同。 图2 常用的几种
Cell:免疫记忆真的是一种「记忆」,可被大脑唤醒!激活特定神经,就可触发免疫反应
activated by designer drugs,由设计药物专门激活的设计受体)——Gq,它能够被 CNO(氯氮平-N-氧化物)激活,这样就能够在炎症消退后通过 CNO 处理重新激活这些神经元。 作者发现,在 DSS 诱导的肠炎消退后,再次激活 InsCtx 神经元会导致小鼠肠壁肌肉层浸润大量的白细胞;流式检测发现,用 CNO 激活 Gq 后,小鼠肠道 IEL(上皮内淋巴细胞)和 LP(固有层淋巴细胞)显著增加,并且分泌促炎性细胞因子 IL-6 的白细胞也明显增加。这些数据说明,激活 InsCtx
PKC系统(protein kinase C system,PKC system)
由于该系统中的第二信使是磷脂肌醇,故此这一系统又称为磷脂肌醇信号途径(phosphatidylinositol signal pathway)。 在这一信号转导途径中,膜受体与其相应的第一信使分子结合后,激活膜上的Gq蛋白(一种G蛋白),然后由Gq蛋白激活磷酸脂酶Cβ (phospholipase Cβ, PLC), 将膜上的脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol biphosphate, PIP2)分解为两个细胞内的第二信使:二酰甘油
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