SunBio Trans-EZ病毒载体制备转染试剂

SunBio Trans-EZ病毒载体制备转染试剂，适用于大多数产毒细胞系（株）的基因转染。在最佳实验条件下，转染后细胞的存活率高达90%以上，转染效率高于其他类型的转染试剂。特点：1.病毒载体的滴度高；2.细胞毒性低；3.生物稳定性高；4.适用范围广泛。

1.细胞状态很大程度上影响了转染效率，推荐使用低代次细胞，并保证细胞状态良好。
2.为优化转染条件，推荐使用Opti-MEM培养基制备转染试剂和质粒复合物；如果没有准备Opti-MEM培养基则用无血清培养基代替。
3.质粒的抽提质量对转染的效果有很大的影响，建议使用高质量无内毒素抽提的超纯质粒，其螺旋质粒含量大于80%，OD260/OD280>1.8。

下述步骤是以10 cm细胞培养器皿质粒转染为例，说明转染步骤及所需注意事项，在其他规格的培养器皿上操作时，按底面积大小等比扩大或缩小转染体系。
1. 转染前一天，将细胞接种10 cm细胞培养器皿中，控制细胞转染时的密度为70-90%。
2. 转染前一小时取出细胞培养器皿，去除原有细胞培养基，加入10 ml的Opti-MEM培养基，将细胞送回培养箱。
3. 制备转染试剂和质粒的复合物：
a. 取1.5 ml Ep管一支，加入待转染的几种病毒载体质粒，用Opti-MEM培养基补齐到500 μl，轻轻混匀；
b. 取1.5 ml Ep管一支，加入35 μl Trans-EZ溶液，用Opti-MEM培养基补齐到500 μl，轻轻混匀；
c. 将Trans-EZ稀释液滴加到质粒稀释液中，边加边轻轻混匀后在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
4.取出细胞培养板，将步骤3得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到细胞培养器皿中，做好标记，放回培养箱。
5. 4-6小时后，除去细胞上清，更换为15 ml正常完全培养基继续培养进行后续实验。