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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Anti-Human CD14 Magnetic Particles - DM
- 库存:
现货
- 供应商:
上海研卉生物
- 规格:
5ml
BD IMag磁珠分选,Anti-Human CD14 Magnetic Particles - DM
1.从抗凝的人(或恒河猴)血液中制备PBMC,最好使用Ficoll-Paque™进行密度梯度离心。*
2.用无菌蒸馏水将BD-IMag™缓冲液(10X)(目录号552362)稀释1:10,或通过补充含有0.5%BSA、2 mM EDTA和0.09%so,dium azi,de.的磷酸盐缓冲盐水来制备1X BD-IAg™缓冲液。在4°C下储存。
3.计数细胞,用过量1X BD IMag™缓冲液洗涤,并小心吸出所有上清液。
4.彻底涡旋BD IMag™抗人CD14磁性颗粒-DM,每10e7个总细胞添加50µl颗粒。†
5.充分混合。在室温下孵育30分钟。‡
6.用1X BD IMag™缓冲液将BD IMag颗粒标记体积增加到1-8 x 10e7个细胞/ml,并立即将试管放在细胞分离磁铁上。孵育8-10分钟。
7.将试管放在细胞分离磁铁上,小心吸出上清液。该上清液含有阴性组分。
8.从细胞分离磁铁中取出试管,并将1X BD IMag™缓冲液添加到与步骤6中相同的体积。通过上下移液轻轻地重新悬浮细胞,然后将试管放回细胞分离磁铁中再放置2-4分钟。
9.将试管放在细胞分离磁铁上,小心吸出上清液并丢弃。
10.重复步骤8和9。
11.在最后的洗涤步骤后,将阳性部分重新悬浮在适当的缓冲液或培养基中,并继续进行所需的下游应用。
*成功制备细胞的提示:
将血液抽入含有EDTA的试管中。
以220-240×g离心一次,去除富血小板血浆。
密度梯度分离后,在PBS中洗涤2-3次。
将悬浮液通过70µm尼龙细胞过滤器,去除细胞团和/或碎屑。
†可能需要滴定BD-IMag™颗粒,以优化恒河猴白细胞的分离。
‡通过快速工作和遵守推荐的孵化时间来避免非特异性标签。
Ficoll-Paque是Amersham Biosciences Limited的商标。
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Transplantation Models to Characterize the Mechanisms of Stem Cell–Induced Islet Regeneration
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