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大量
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近岸
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200U
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· 热敏性磷酸酶说明
本热敏性磷酸酶为南极嗜冷菌株TAB5中分离的磷酸酶基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。热敏性磷酸酶能催化除去DNA或RNA末端的5’磷酸基团。在克隆时将载体DNA用热敏性磷酸酶处理后其片段缺少连接酶所必须的5’磷酸末端，因此载体不能进行自连接，可以大大降低载体自连的背景。
· 热敏性磷酸酶用途
除去载体5’末端的磷酸基团，减少自连背景
去除PCR产物中残留的dNTP和焦磷酸盐
除去DNA探针5’末端的磷酸基团，为5’末端磷酸化标记准备最适底物
蛋白质的去磷酸化。
· 质量保证
本热敏性磷酸酶经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
· 使用建议
热敏性磷酸酶在1× HSP Buffer中有最适酶活力。如果要在限制性酶切buffer中进行反应，必须在反应体系中添加10×HSP Buffer至1×终浓度。37℃温育。
· 其他说明
详细内容请参考说明书
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文献和实验一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理； 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀，其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80，82％的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加，从而使溶质的溶解度降低
相关专题 一、实验目的 1. 掌握Comori 法的基本原理和方法。 2. 观察酸性磷酸酶在细胞内的分布状况。 二、实验原理 酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基，在PH5.0 的环境中，磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅。但因其是无色的，所以再经过与硫化铵作用，形成棕黑色的硫化铅沉淀，由此就能显示酸性璃酸酶在细胞内的存在与分布。 本实验的技术特点是：①用冷冻涂片和中性福尔马林固定，可避免在固定、包埋及制片过程中酶的失活
目的要求 1．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 2．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布 基本原理 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。 ACP在酸性条件
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