Caspase-9活性检测试剂盒(分光光度法)

特别提示：包括Caspase-9活性检测试剂盒(分光光度法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Caspase-9活性检测试剂盒(分光光度法)
英文名称：Caspase-9 activity assay kit

产品货号：Caspase-9活性检测试剂盒(分光光度法)
产品规格：100T|50T|20T



除了Caspase-9活性检测试剂盒(分光光度法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：DNA损伤/断裂分析试剂盒(IF FM HCS法，橙/绿/蓝)
货号：KFS341
规格：100T
哺乳动物细胞中，双链断裂（DSB）的基因组DNA 是一种潜在的致命病变。现已确知DSB 的形成为导致H2A 组蛋白的磷酸化。具体来说，在DNS 双链断裂处形成DNA 灶的过程中，DNA 损伤诱导剂可以诱导组蛋白变体H2AX 的在Ser139 位点上的磷酸化。磷酸化的H2AX 有利于募集蛋白质从而帮助DSB 部位进行修复。在哺乳动物细胞中，磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶，如ATM，ATR、DNA-PKCs 蛋白，以及磷酸化的组蛋白变体，H2AX。

我司DNA 损伤试剂盒通过高内涵分析可以对于同一细胞的健康参数、遗传毒性和细胞毒性进行同时定量分析。通过以磷酸化的H2AX（Ser139）抗体检测DNA 损伤，可以对遗传毒性进行分析，进而反映DNA 损伤情况。而细胞毒性的分析是通过试剂盒提供的死活细胞核染料进行染色区分鉴定的。

名称：Caspase 3活性检测试剂盒
货号：HR0424
规格：20T/50T/100T
Caspase 3 活性检测试剂盒(Caspase 3 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 3酶活性或纯化的Caspase 3酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3 也称CPP32、Yama或apopain，有时被写作caspase-3或caspase3，属于caspase 家族的CED-3 亚家族(CED-3 subfamily)，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3 介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外，caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡也起到关键作用。
本Caspase 3活性检测试剂盒是基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA产生黄色的pNA，pNA在405nm 附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-3检测。

储存条件：裂解缓冲液和检测液室温保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定 A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 样品适合采用 Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度接近 1-3mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase 激活比较强的时间点进行检测。
● Ac-DEVD-pNA 避光保存，使用过程中尽量避光。
● Ac-DEVD-pNA溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
2．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 3活性检测
1．取10μl 大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl Ac-DEVD-pNA(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-3 水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 3 活性程度。