一步法大提质粒DNA提取试剂盒

特别提示：包括一步法大提质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法大提质粒DNA提取试剂盒
英文名称：One-step plasmid DNA large-scale extraction kit
产品规格：5次

本试剂盒是在我司一步法质粒DNA提取试剂盒2.0(BTN70903)基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。

试剂盒特点：
1.快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。
2.超螺旋比例高，独*(代"创")的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA的损害，得到的质粒DNA 切口更少。
3. DNA 纯度高，几乎没有基因组DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9 之间。
4. DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 最大吸附量为600μg DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单，重复性和稳定性好。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
大离心吸附柱	5套
通用预洗液	100ml
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶液A需要4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 用50mL离心管分数次收集10-100mL 新鲜的菌液，一般可以5000rpm离心10分钟，去除上清即得细菌沉淀。
2. 往细菌沉淀中加入20mL溶液A，充分振荡悬浮或吹打混匀。
 注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。
4. 6000rpm离心5-10分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5. 将10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
6. 重复上步一次。
7. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
8. 重复上步一次。
9.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。
10. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL 通用洗脱液(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
11. 重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
12. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。
3．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
4．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
5．从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组DNA。