- ￥1990
- 泽叶生物
- 中国/德国
- ZY13-74400
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用注意事项
1. 试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
2. 配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。
3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。
步骤、过程：
构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。
如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除。
探针的切除将会引起：
将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号。
将探针从目的链上去除，使引物继续沿模板链末端延伸。因此，探针的介入并不会抑制整个PCR过程。
内源性对照：
数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量，研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。
标准品：
因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子绝对计数，所有无需标准品。 由于样品量会除以校准品的量，所以标准曲线中的单位便被去除了。因此，对于标准品来说，只需知道其相对稀释比。对于相对定量，任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。
每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
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文献和实验。 表27－1 人类出血热病毒及其所致疾病 病毒种属 病毒 媒介 所致疾病 分布 披膜病毒 Chikungunya病毒 蚊 Chikungunya 亚洲、非洲 黄病毒 黄热病病毒 蚊 黄热病 非洲、南美洲 登革病毒 蚊 登革热 亚洲、加勒比海地区 Kyasanur森林病病毒 蜱 Kyasanur森林病 印度 Omsk出血热病毒 蜱 Omsk出血热 俄罗斯 布尼亚病毒 肾综合征出血热病毒 啮齿动物为主 肾综
病毒；多重PCR；检测 口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）、猪水疱病(Swine vesicular disease,SVD)和水疱性口炎(Vesicular stomatitis,VS)都是猪的重要病毒性传染病，以口和蹄部产生水疱性损伤为特征，其临床症状极为相似，引起严重的公共卫生问题，均被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。3种水疱性疾病在临床症状上无法区别，必须通过鉴别诊断。目前对3种疫病的诊断多采用病原分离及常规的血清学方法，所需时间较长
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