- ￥1490
- 泽叶生物
- 中国/德国
- ZY13-7ZY1300
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用注意事项
1. 试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
2. 配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。
3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。
步骤、过程：
构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。
如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除。
探针的切除将会引起：
将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号。
将探针从目的链上去除，使引物继续沿模板链末端延伸。因此，探针的介入并不会抑制整个PCR过程。
内源性对照：
数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量，研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。
标准品：
因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子绝对计数，所有无需标准品。 由于样品量会除以校准品的量，所以标准曲线中的单位便被去除了。因此，对于标准品来说，只需知道其相对稀释比。对于相对定量，任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。
每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
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文献和实验梭形杆菌属（ fusobacterium ）由于菌体形态两端尖锐呈梭形而得名。存在于人和动物口腔、上呼吸道、肠道、泌尿系的正常菌群，以口腔居多。革兰氏阳性，小或中等在小两端钝圆形的杆菌，无鞭毛，无芽胞，无荚膜。培养需专性厌氧，最适温度 37 ℃， ph7.0 营养要求不高 , 可在普通培养基上生长。硫乙醇酸盐和半胱氨酸对其有抑制作用。不产生触酶，对 h2o2 敏感，培养基吕触酶能刺激其生长。 梭形杆菌可与螺旋体混合感染，引起
） （三）革兰氏阴性无芽胞杆菌 1 类杆菌属（Bacteroides） 2 梭形杆菌属（Fusobacterium） （四）革兰氏阳性无芽胞杆菌 1 双歧杆菌属（Bifidobacterium） 2 乳杆菌属（Lactobacillus） 3 真杆菌属（Eubacteriun） 4 丙酸杆菌属（Propionibacterium） 第一节 厌氧芽胞杆菌 厌氧芽胞杆菌只有一个属，称梭状芽胞杆菌属（Clostridium
lentum 迟缓真杆菌 Eubacterium limosum 粘液真杆菌 Ewingella americana 美洲爱文菌 Flavimonas oryzihabitans 栖稻黄色单胞菌 Fusobacterium mortiferum 死亡梭杆菌 Fusobacterium necrogenes 坏疽梭杆菌 Fusobacterium necrophorum 坏死梭杆菌 Fusobacterium nucleatum 具核梭杆菌 Fusobacterium
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