小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)

产品及特点

小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽 疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性传染病。它是世界 动物卫生组织(OIE)法定的 A 类传染病,我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是专门用于小 反刍兽疫病毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒，在动物或者动物产品的检测领域有广泛用 途，它具有下列特点： 

 

 

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 双酶一管式 RT-PCR，操作简单快捷。本试剂盒足够 25 次 30uL 体系的 RT-PCR 反应。

3. 提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。

4. 引物经过优化，特异性高，引物是根据 PPR 病毒保守的 N 基因设计，产物长度为 1416 bp。 

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号	成  份	规格
试剂一	双酶一管式 RT-PCR Buffer，2×	375 uL
试剂二	MMLV-Taq Mix	50 uL
试剂三	RNase-free 水	1 mL
试剂四	PPRV 专一性引物一	50 uL
试剂五	PPRV 专一性引物二	50 μL
试剂六	PPRV 阳性对照	50 μL
试剂七	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 6 个月。 

自备试剂 样品 RNA。 
 

 

使用方法 注意：所有离心管用前全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个 30uL 体系的 RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。

一、样品 RNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 或柱 式病毒 RNAout。

二：RT-PCR 2、在一干净的无 RNase 的 PCR 管中，按下表配制 RT-PCR 反应体系（30 uL 体系）:

成分	样品	阳性对照	阴性对照
RNA 模板（自备）	1-10 uL
PPRV 阳性对照		2μL
PPRV 专一性引物一	2 uL	2 uL	2 uL
PPRV 专一性引物二	2 uL	2 uL	2 uL
RNase-free 水	补水到 13 uL
双酶一管式 RT-PCR Buffer	15 uL	15 uL	15 uL
MMLV-Taq Mix	2 uL	2 uL	2 uL

3、轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR，反应参数是： 

过程	温度	时间
逆转录	42℃	60 min
预变性	94℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	94℃	1 min
	55℃	1 min
	72℃	2 min
延伸	72℃	10 min

 

三、电泳检测

4、取 10-20 uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为 1416 bp。阳性对照必须出现 1416bp 的 PCR 产物，否则 PCR 体系有问题，需要寻找原因。 如果阴性对照出现 1416bp 的 PCR 产物，则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污染， 需要把样品制备和 RT-PCR 隔离进行。 

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！