HIV-1P24抗原检测试剂盒

用途：

本试剂盒采用ELISA法可定性、定量检测P24抗原，适用于血清、血浆及HIV培养上清标本，仅限于HIV辅助诊断和实验室研究。

测定原理：

本试剂盒采用双抗体夹心法测P24抗原，即将抗P24的单克隆抗体包被于微孔板，待测样本加入已包被的反应孔内孵育，若标本中含有HIV-1p24抗原，则该抗原与孔内的抗体形成抗原抗体复合物，加入酶标抗HIV-1p24单抗，孵育后，酶标抗体与抗原抗体复合物上的抗原结合，再与底物反应显色。最后用硫酸终止反应，用酶标仪测定OD值，确定反应的阴阳性。

试剂盒组成：

1、微孔反应板 8孔×12 3、阴性对照 6ml 5、酶结合物 13 ml 7、显色剂 7ml 9、终止液 6ml

2、裂解液 3.5ml 4、阳性对照 1ml 6、20倍浓缩洗涤液 50ml 8、底物液 7ml

测定步骤：

1、配液：将50 ml浓缩洗涤液（20倍）用蒸馏水稀释至1000 ml。

2、定量P24系列稀释：阳性对照（PC）含有320pg/ml的重组P24抗原，用阴性对照(NC)倍比系列稀释五个浓度的阳性对照（稀释方法见下表），如果定量测定的样品为细胞培养上清液，则需用未感染的细胞培养上清液进行系列稀释抗原，每个稀释浓度做两个复孔。

表1

3、编号：将样品对应孔按序编号，每板应设阴性对照3孔、阳性对照两孔、空白 1孔，如果测定样品为细胞培养上清液 ，则需用未感染的细胞培养上清液做阴性对照3孔。

4、每个反应孔中加入25μl裂解液。

5、将100μl待测样品或对照品加入到有裂解液的反应孔中，振荡30-60秒混匀，置37℃孵育1小时。

6、洗板5次，拍干后每孔加入酶结合物125μl/孔（空白孔不加），置37℃孵育45分钟。

7、洗板5次，拍干后每孔加入底物（底物液：显色液=1：1混合）125μl/孔。置37℃孵育15—30分钟。

8、加入终止液50μl/孔。

9、用酶标仪读数，波长450nm(建议使用双波长酶标仪，参考波长630nm)。

结果判定：

1、阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照OD值应≤0.150。

2、阳性对照的正常范围：正常情况下定性测定(160pg/ml) 阳性对照OD值≥1.000；定量测定80 pg/ml阳性对照OD值≥0.650

3、临界值计算：测定样品为血清或血浆时临界值=阴性对照平均值+0.071；测定样品为细胞培养上清液则临界值=细胞培养上清液阴性对照平均值+0.071

4、阳性定性判定：测试标本的OD值小于临界值则为阴性；测试标本的OD值大于或等于临界值则为阳性。

5、阳性定量判定：参照如下图表的方法，绘出标准曲线并进行定量判定。

表2

NC1=0.033 NC2=0.032 NC3=0.034 NCx=0.033

Cut off=0.033+0.071=0.103

注意事项：

1、从冷藏环境取出的试剂盒内全部成份及待测标本应在室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时密封保存于冰箱中，已备后用（一般不超过3天）。

2、洗涤液若出现结晶，可置37℃使之溶解后方可使用。

3、结果判定必须以酶标仪读数为准，建议使用双波长450nm/630nm检测，并在反应终止后20分钟内完成。

4、本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室 。

5、检测必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则的规定，严格防止交叉污染。操作时须带手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染务处理，终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

6、加液时必须用加液器，并经常校对加液器的准确性。

7、洗涤时 各孔均需加满洗液，防止孔口内有游离酶存在。使用洗板机洗涤应设定30-60秒的浸泡时间。

8、操作应严格按说明书进行，不同批次试剂不得混用，封板膜为一次性用品，不能重复使用。

储存条件：2-8℃避光保存。 有效期：12个月。