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北京北嘉美仪生物科技有限公司
ABI 310 型基因分析仪,DNA 测序仪
随着分子生物技术在人类基因组测序、人类遗传病、传染病和癌证的临床诊断、生物工程药物的筛选、动植物杂交育种、动物亲子鉴定和性别鉴定、植物疾病诊断、法医鉴定等方面的应用,科学工作者越来越需要一种自动化程度更高,应用更广泛,价格更为适中的遗传分析仪,为满足这种需要,美国 Applied Biosystems 公司于 1995 年推出了 310 型全自动遗传分析仪,310 型不仅具有 DNA 测序、PCR 片段大小分析和定量分析功能,而且实现了全部操作自动化,包括自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析。
310 型全自动遗传分析仪采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯-酰胺凝胶平板电泳进行 DNA 测序分析,繁锁的灌胶和上样过程全部由泵和自动进样器完成。每次测序之前,只需把样品放到自动进样品的样品盘中,设置电泳参数、数据收集和分析参数即可。Applied Biosystmes 公司提供经多年潜心研究的专利产品-凝胶高分子聚合物,包括 DNA 测序胶和 GeneScan 胶,凝胶颗粒孔径均一,避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。此外,Applied Biosystems 公司还提供各种试剂盒,应用软件和全球性的技术支持。
ABI 310 型全自动 DNA 测序仪具有以下特点:
l 应用广泛
测序及片段分析的应用包括未知序列测定、已知序列的比较测序、杂合子分析(Heterozygote Detection)、SSCP 分析(SSCP Analysis)、微卫星序列分析(Microsatellite Analysis)、长片段 PCR(分析 Long PCR)等
自动化程度高
自动灌胶:在分析一个样品前,泵自动冲掉上一次分析用过的胶,灌入新胶。
自动取样:把待测样品放到自动进样器的样品盘中,由计算机程序控制自动进样。自动进样器有 48 孔和 96 孔两种样品盘,其中 96 孔样品盘与本公司 9600 型 PCR 仪的样品盘一致,所以经 PCR 循环测序反应的样品可直接放到 310 测序仪中测序,此外特殊设计的样品盖可防止蒸发。
多色荧光毛细管测序技术:
由于采用专利四色荧光标记技术,使四个测序反应产物可以在一根毛细管内电泳,使毛细管测序成为可能,同时也大大提高了测序精度,即降低了同位素测序因泳道间迁移率差异对精度的影响。而且与 377 型遗传分析仪一样,310 型遗传分析仪也采用 CCD 摄像机作为检测器,使每个样品分析时间仅为 2.5 小时。
全自动电脑控制:
只需把测序样品放到自动进器样品盘中,输入样品信息,如:进样次序、进样时间和电压,和数据分析模式,如:SSCP、微卫星序列、VNTRS、DNA 序列分析等模式,其余的工作,如:灌胶、进样、电泳、检测、数据分析全部由电脑控制进行。此外电脑还控制电泳的温度、电压、时间,同步监测电泳的情况,在分析上一个样品数据的同时还可以收集下一个样品的数据。
丰富的应用试剂盒及软件
Applied Biosystems 公司提供多种应用试剂盒及应用软件,如用于亲子鉴定和个体识别的 Profiler Plus, Cofiler, SGM plus 试剂盒,用于真菌鉴定分型的 D2 rRNA 测序试剂盒,用于器官移植配型分析的 HLA 基因测序试剂盒,用于细菌鉴定分型的 16s rRNA 测序试剂盒,用于爱滋病毒突变检测及新药研发的 HIV Genotyping 试剂盒,用于脆性 X 检测的 Fragile X 试剂盒,用于单核苷酸多态性分析的 SNapshot 试剂盒,用于动植物育种、基因组作图及差异显示的 AFLP 试剂盒等,广泛应用于人类、动植物、微生物等各项研究领域。
性能指标:
310 型遗传分析仪性能表
| 应用举例 |
分离胶 |
毛细管 |
电泳时间及温度 |
分辨大小 |
24 小时产率 |
|
| 标准测序 |
DNA 测序 |
POP-6 |
内径 50mm |
2.75 hr |
600Nt |
5220Nt |
| 快速测序 |
比较测序 |
POP-6 |
内径 50mm |
60 min |
400Nt |
9120Nt |
| 片段大小分析 |
微卫星分析 |
POP-4 |
内径 50mm |
30 min |
350Nt |
720 个片段 |
| VNTRs |
3.0% 片段分析胶 |
内径 50mm |
21 min |
350Nt |
204 个样品 |
|
| 突变检测 |
SSCP |
3.0% 片段分析 |
内径 50mm |
20 min |
300Nt |
72 个样品 |
| 定量 |
RT-PCR |
3.0% 片段 |
内径 50mm |
22 min |
1000Nt |
195 个样品 |
规格指标:
检测系统:CCD 检测荧光波长范围:525-650 nm
光源:氩离子激光光源 激发波长:488nm 和 4nm 激发功率:10mW
电泳电压:100V – 15000V
灌胶泵:压力可高达 1,800psi
样品盘:两种规格:48 孔或 96 孔
控温板:毛细管温度范围:室温-60°C
电脑:苹果 G3 电脑或同级别电脑
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文献和实验DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。【原理】 ABI PRISM310型基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板
Automated Fluorescent DNA Sequencing on the ABI PRISM 310 Genetic Analyzer
Three fundamental technologies have emerged in genetic analysis that have widespread and immediate benefits. DNA synthesis, fluorescence-based DNA analysis, and the polymerase chain reaction (PCR) are being integrated for a range
file, Instrument File的选定。 4. 编好Sample Manager后, 点一下Start开始分析。 5. 双击分析完的Sample File Name, 可得到测序结果。 自动化测序已成为当今基因序列分析的主流,ABI公司出产的310型测序仪是实验室中使用的一种型号。在实际使用中,我们只有注意好Pump Block的清洁及维护、安装毛细管,灌胶细节、样品准备、测序程序的运行、测序结果的分析等细节,才能让此测序仪器更好地为我们服务。
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