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09/04/1900
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--
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250g
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文献和实验体积的 0.5 M EDTA,以终止消化。然后用等体积酚抽提、等体积氯仿抽提,2.5 倍体积乙醇沉淀,少量 TE 溶解(参见 DNA 提取方法,但离心转速要提高到 12000 g,以防止小片段 DNA 的丢失)。如果需要两种酶消化 DNA,而两种酶的反应条件可以一致,则两种酶可同时进行消化;如果反应条件不一致,则先用需要低离子强度的酶消化,然后补加盐类等物质调高反应体系的离子强度,再加第二种酶进行消化。三、 基因组 DNA 消化产物的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是目前分离核酸片段最常用的方法,制备
bp 片段,以 pBS 菌液为模板扩增 1500 bp 片段。 模板:菌液 OD600=0.8 时 2 μL /50 μL PCR 扩增程序:同上 a 扩增程序同。 结果:Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix 试剂对于质粒或菌液均可高效率的扩增。取扩增产物 10 μL 用 1% 琼脂糖凝胶电泳进行分析可见明亮条带。 二、genomic DNA扩增 1.大肠杆菌DNA扩增 模板:大肠杆菌DNA 50 ng/50 μL PCR扩增程序: 循环数 Step 温度
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB(50 mL)/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培养。3. 大约3 h,OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀,吸取
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