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- 文献和实验
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09/04/1900
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--
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250g
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文献和实验产物分析等方面有重要价值。基本方法是将 DNA 标本用限制性内切酶消化后,经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段,然后经碱变性,Tris 缓冲液中和,高盐下通过毛吸作用将 DNA 从凝胶中转印至硝酸纤维素滤膜(尼龙膜也较长用)上,烘干固定后即可用于杂交。凝胶中 DNA 片段的相对位置转移到滤膜的过程中继续保持着。附着在滤膜上的 DNA 与 32P 标记的探针杂交,利用放射自显影术确定探针互补的每条 DNA 带的位置,从而可以确定在众多酶解产物中含某一特定序列的 DNA 片段的位置和大小
识别天然抗体的二抗 直接源头遏制:将抗体直接交联到 bead 上,或者将抗体交联到 protein A/G 上,避免洗脱干扰 4、靶蛋白没有条带 裂解液不合适,或者没有添加抑制剂,导致靶蛋白或者饵蛋白构象改变不能结合或者降解 饵蛋白较难洗脱,换成高强度的洗脱缓冲液 选用的抗体不合适,建议 IP 验证过的抗体,并优化下抗体用量 蛋白间为弱相互作用,或者相互作用依赖翻译后修饰 5、琼脂糖难离心,每次总会吸上来一点儿 使用带滤膜的离心柱,下部有接样管,琼脂糖完全截留在滤膜上 换成磁珠 更多
相关专题 本文主要介绍了利用Southern印迹杂交技术来获得DNA分子中基因编码区的大小和位置的实验原理、方法步骤。主要分成待测核酸样品的制备和 琼脂 糖凝胶电泳分离待测DNA样品两部分。 Southern印迹杂交仪器 实验原理 核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成
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