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- 百奥莱博
- KM0147-EDP
- 北京
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
301
- 英文名：
Reactive Oxygen Species Assay Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100T～500T
特别提示：包括活性氧检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：活性氧检测试剂盒
英文名称：Reactive Oxygen Species Assay Kit
产品货号：KM0147
产品规格：100T～500T
本试剂盒是一种利用荧光染料DCFH-DA进行细胞内活性氧水平检测的常用方法。检测原理在于DCFH-DA本身无荧光，能自由穿过细胞膜，一旦进入细胞后，被胞内的酯酶水解生成无荧光的DCFH。DCFH不能穿透细胞膜，从而保留在胞内。此时胞内的活性氧可以氧化DCFH生成有荧光的DCF。通过DCF荧光的强弱即可反映活性氧的水平。因检测对象和反应体系的不同，本试剂盒可检测100-500个样品。
试剂盒组成：
| 组分 | 规格 |
| 活性氧探针DCFH-DA(10mM) | 100μL |
| 活性氧阳性对照(50mg/ml) | 1mL |
保存：-20oC保存，有效期一年。
使用方法：
一、装载探针
对于刺激时间较短（通常2h以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照和/或待研究药物刺激细胞；对于刺激时间较长（通常6h以上）的细胞，先用活性氧阳性对照或待研究药物刺激细胞，后装载探针。
A．原位装载探针（仅适用于贴壁细胞）
1．检测前一天进行细胞铺板，确保活性氧检测当天细胞汇合率达到50~70%。
2．吸出细胞培养液，加入适量体积以及浓度的待研究药物，于37oC细胞培养箱内孵育，具体诱导时间根据细胞类型和药物自身特性决定。
（可选）设置阳性对照：先用无血清培养液按照1:1000比例稀释阳性对照，通常37℃培养箱内刺激20~30min可以观察到显著的活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异（刺激时间可参考文献或实验经验来调整）。如果刺激后30min内未观察到活性氧水平升高，可以适当提高阳性对照的工作浓度；反之，如果活性氧升高过快，则适当降低言行对照的工作浓度。
3．按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA（10mM），使其终浓度为10μM.。吸出细胞培养液，加入适当体积DCFH-DA工作液。
注意：加入体积以能充分盖住细胞为宜。对于6孔板，每个孔加入DCFH-DA工作液不少于1ml。对于96孔板，每个孔加入DCFH-DA工作液不少于0.1ml。
4．37oC细胞培养箱内孵育20min。
5．用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
B．收集细胞后装载探针
1．按照常规方法，清洗并收集足量的细胞。
注意：保证细胞的状态健康。
2．用适量体积以及浓度的待研究药物重新悬浮细胞，于37oC细胞培养箱内孵育，具体诱导时间根据细胞类型和药物自身特性决定。
（可选）设置阳性对照：先用无血清培养液按照1:1000比例稀释阳性对照，通常37℃培养箱内刺激20~30min可以观察到显著的活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异（刺激时间可参考文献或实验经验来调整）。如果刺激后30min内未观察到活性氧水平升高，可以适当提高阳性对照的工作浓度；反之，如果活性氧升高过快，则适当降低阳性对照的工作浓度。
3．探针装载前，按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA（10mM），使其终浓度为10μM.。
4．离心，吸出细胞内刺激药物，之后用适量DCFH-DA工作液重悬细胞，使得细胞密度为1×106~2×107/ml。
注意：细胞密度需根据后续检测体系，检测方法，以及检测总量来调整。例如，对于流式分析，单管检测内细胞数目控制在104~106之间。
5．37oC细胞培养箱内孵育20min。每隔3~5min颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
6．用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
二、检测
1．原位装载法
可用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
2．收集细胞后装载法
可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可用激光共聚焦显微镜直接观察。
三、参数设置
使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可用FITC的参数设置检测DCF。
注意事项：
1．探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
2．探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。
3．尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
4．对于某些细胞，若发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000～1:5000稀释DCFH-DA，使DCFH-DA的工作浓度为2～5μM。探针装载时间也可依情况在15～60min内适当进行调整。
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文献和实验就到 有些抗体有现货，有些抗体没有现货，需要订购。 米宝 只有等着了。。 bianbenjamin 中山金桥，北京的，他们的二抗也是jakson分装的，我个人觉得二抗没有那么关键。 米宝 今天做上了。。问公司要了点进口分装的。。明天看出不出结果了。。晕 米宝 出结果了！结果条带比较杂，但是p-akt还是比较清楚的！另外，出现诡异现象就是，无法解释！糖
宽度:750 px高度:422 px维持原图长宽比:确认 ningwang 我在做关于细胞活性氧浓度的测定，来探讨药物对细胞的保护作用。买的是碧云天生成的活性氧检测试剂盒，但是不知道胞内的荧光用什么仪器可以检测得到，望各位指导。 伽利略 流式细胞仪 实际上这些问题你可以发信直接问试剂公司。 哈啰 激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪都可以的，试剂盒里说明书上有写的，个人
resonance（EPR，电子顺磁共振谱）Detection of ROS（活性氧类物质/活性氧）by election paramagnetic resonance（EPR，电子顺磁共振谱）（胰腺组织的ROS生成）。（2） ； ；DCF法： dichlorofluorescein （DCF）二氯荧光黄[1，8，13]活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使
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