葡萄糖-6-磷酸酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC3320
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体40 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体12 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂三	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂四	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂五	液体8 mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	液体1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前用8 mL蒸馏水溶解备用。
2. 试剂四：临用前用8 mL蒸馏水溶解备用。
3. 标准品：10 μmol/mL 磷标准液。临用前用蒸馏水稀释16倍至0.625 μmol/mL的标准溶液备用。
4. 工作液的配制：试剂二中加入5 mL试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
5. 定磷试剂的配制：按H₂O:试剂三:试剂四:试剂五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 若A大于1或者显色完成后有沉淀产生，将上清液或者粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。
3. 定磷试剂应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠肌肉组织加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得A测定管=0.913、A对照管=0.869、A空白管=0.014、A标准管=0.509，计算ΔA=A测定管-A对照管=0.913-0.869=0.044，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.509-0.014=0.495，按样本质量计算酶活得：

G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.044÷0.495÷0.1=277.7778 U/g 质量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得A测定管=0.379、A对照管=0.237、A空白管=0.014、A标准管=0.509，计算ΔA=A测定管-A对照管=0.379-0.237=0.142，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.509-0.014=0.495，按样本质量计算酶活得：

G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.142÷0.495÷0.1=896.4646 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA -ation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

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