- ￥1550
- Solarbio
- 北京
- BC4175
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC4175-100T/96S
- 规格：
100管/96样
微量法
货号：BC4175
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体120 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂二 | 液体×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
- 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。
- 试剂一：临用前加入5 mL试剂三溶解。可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
- 试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入15 mL乙醇充分混匀，配好后2-8℃保存。
- 工作液的配制：将试剂一、试剂二、试剂三按1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液现用现配。
CAD 是木质素生物合成途径中的关键酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+，在340nm下测定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
- 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。
- 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：
| 试剂名称 | 空白管 | 测定管 |
| 样本（µL） | 20 | |
| 蒸馏水（µL） | 20 | |
| 工作液（µL） | 180 | 180 |
| 在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于25℃水浴或培养箱5min（酶标仪有控温功能可将温度调至25℃），拿出迅速擦干测定5min10s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A1测定-A2测定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。 | ||
A、按微量石英比色皿计算：
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=321.54×ΔA÷W
3、按细菌或细胞数量计算
酶活定义：每104个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（500×V样÷V样总）÷T= 0.643×ΔA
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V样：反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，5min；500：细菌或细胞总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
B、按96孔UV板计算：
将将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。
注意事项：
- 当A1小于0.8，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
- 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.04。
- 取约0.1g三叶草叶，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清，按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测定计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.7889-1.7045=0.0844，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9630-0.9433=0.0197，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0844-0.0197=0.0647，按样本质量计算得：CAD酶活（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W=208.0364 U/g 质量。
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文献和实验| AuthorCongcong Wang, Yinhua Chen, Songbi Chen, Yi Min, Yanqiong Tang, Xiang Ma, Hong Li, Juanjuan Li, Zhu Liu | Publish_toCARBOHYDRATE POLYMERS |
| IF11.2000 | PMID37479443 |
螯合，从而终止Bad在线粒体膜上对Bcl―2或Bcl―XI。的拮抗作用，使得被释放后的Bcl―2或Bcl―XI．恢复抗细胞凋亡的功能。另外，Akt也能直接抑制半胱氨酸天冬氨酸酶―9(caspase―9)的活性。前半胱氨酸天冬氨酸酶―9(pro―caspase―9)被Akt磷酸化以后丧失活性，从而中断了下游的信号。注：IAP：凋亡抑制蛋白；GH：生长因子；GHR：生长因子受体；Apaf：凋亡蛋白酶活化因子； Cyto―C：细胞色素C；laminBl：核纤素B1 CAD：肉桂醇脱氢酶；PARP：腺苷二
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