土壤木质素过氧化物酶（S-Lip）活性检测试剂盒 微量法

土壤木质素过氧化物酶（S-Lip）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1975
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体12 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体15 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体10 mL×1瓶	2-8℃保存

产品说明：
木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、移液器、水浴锅、震荡仪、研钵、甲苯（> 98%，AR）、30-50目筛、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至310nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。
2. 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入以下试剂）：

	对照管	测定管
土样（g）	0.04	0.04
甲苯（μL）	30	30
充分混匀，室温静置15min
试剂一（μL）	-	200
蒸馏水	200	-
试剂二（μL）	120	120
试剂三（μL）	80	80

 

充分混匀，30℃振荡反应3h，冰浴5min，12000g 4℃离心10min，小心取200μL上清液于微量石英比色皿中或96孔UV板中测定310nm处的吸光值，分别记为A测定、A对照，计算ΔA=A测定-A对照。 注：若上清液不澄清可将上清液全部取出，再次离心后吸取200μL上清液测定。

实验实例：

1. 称取两份0.04g槐树土土样于EP管中，分别为测定管及对照管，之后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得ΔA=A测定-A对照=1.069-0.374=0.695，按土样质量计算酶活得：

S-LiP活性（U/g 土样）=25.687×ΔA÷W=25.687×0.695÷0.04=446.312 U/g 土样。

1. 称取两份0.04g冬青土土样于EP管中，分别为测定管及对照管，之后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得计算ΔA=A测定-A对照=0.424-0.185=0.239，按土样质量计算酶活得：

S-LiP活性（U/g 土样）=25.687×ΔA÷W=25.687×0.239÷0.04=153.480 U/g 土样。
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