- ￥3250
- Solarbio
- 北京
- BC1445
- 2026年05月28日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Micro Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅤActivity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC1445-100T/48S
- 规格：
100管/48样
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1445
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体50mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 液体6mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂五 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂六 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂七 | 液体10mL×1瓶 | 常温保存 |
| 标准品 | 液体1mL×1支 | 2-8℃保存 |
- 试剂二：临用前每支加入1.11 mL双蒸水，充分溶解备用，分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；
- 试剂五：临用前加入10mL双蒸水，充分溶解；-20℃可保存4周；
- 试剂六：临用前加入10mL双蒸水，充分溶解；2-8℃可保存4周；
- 标准品：10 μmol/mL磷标液，临用前取50μL 10 μmol/mL磷标液，加入1950μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.25μmol/mL标准液使用，现用现配（实验中每管需要40μL，为减小实验误差，故配制大体积）；
- 定磷试剂的配制：根据用量将H2O：试剂五：试剂六：试剂七=20mL:10mL:10mL:10mL（约100T）混合备用，配好的定磷试剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用多少配多少）。
产品说明：
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
- 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。
- 测定胞浆时，定磷后反应液可能会有絮凝产生，测定前混合均匀即可，并不影响测定结果。
- 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
- 本试剂盒试剂足够完成100管反应。
- 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为100T/24S）
- 上清中复合体Ⅴ活力的计算：
复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=ΔA1÷ΔA标准×C标准×V酶促×1000÷(W÷V提取×V样本)）÷T
=20×ΔA1÷ΔA标准÷W
ΔA1：上清测定值；C标准：标准溶液浓度，0.25μmol/mL；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol；V提取：加入提取液体积，1.0mL；V样本：样本体积，0.05mL；V酶促：酶促反应总体积，0.12mL；T：反应时间，30min。
B、沉淀中复合体Ⅴ活力的计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=ΔA2÷ΔA标准×C标准×V酶促×1000÷(W÷V提取×V样本)）÷T
=12×ΔA2÷ΔA标准÷W
ΔA2：沉淀测定值；C标准：标准溶液浓度，0.25μmol/mL；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol；V提取：沉淀重悬体积，0.6mL；V样本：样本体积，0.05mL；V酶促：酶促反应总体积，0.12mL；T：反应时间，30min。
C、样本复合体Ⅴ总活力的计算：
样本复合体Ⅴ总活力即为上清中复合体Ⅴ活力与沉淀中复合体Ⅴ活力之和。
按样本质量计算：复合体Ⅴ（U/g 质量）=20×ΔA1÷ΔA标准÷W+12×ΔA2÷ΔA标准÷W
实验实例：
- 取0.1g兔子肾脏进行样本处理，上清液和沉淀都稀释4倍后按照测定步骤操作，使用96孔板测得ΔA标准=A标准管-A空白管=0.379-0.047=0.332，上清液的ΔA1=A测定管-A对照管=0.679-0.119=0.560，沉淀的ΔA2=A测定管-A对照管=0.773-0.052=0.721，则按样本质量计算得：上清中复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=20×ΔA1÷ΔA标准÷W×4（稀释倍数）=1349.4 U/g 质量沉淀中复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=12×ΔA2÷ΔA标准÷W×4（稀释倍数）=1042.4 U/g 质量复合体Ⅴ（U/g 质量）=20×ΔA1÷ΔA标准÷W×4+12×ΔA2÷ΔA标准÷W×4=2391.8 U/g 质量。
- 取0.1g冬青进行样本处理，上清液和沉淀都稀释2倍后按照测定步骤操作，使用96孔板测得ΔA标准=A标准管-A空白管=0.379-0.047=0.332，上清液的ΔA1= A测定管-A对照管=0.535-0.320=0.215，沉淀的ΔA2=A测定管-A对照管=0.357-0.089=0.268，则按样本质量计算得：上清中复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=20×ΔA1÷ΔA标准÷W×2（稀释倍数）=259.04 U/g 质量 沉淀中复合体Ⅴ活性（U/g 质量）=12×ΔA2÷ΔA标准÷W×2（稀释倍数）=193.73 U/g 质量复合体Ⅴ（U/g 质量）=20×ΔA1÷ΔA标准÷W×2+12×ΔA2÷ΔA标准÷W×2=452.77 U/g 质量。
- Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)
- Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J].Free Radical Biology and Medicine,2019,134:229-238.
BC0510/BC0515 线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒
BC3230/BC3235 线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒
BC3240/BC3245 线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒
BC0940/BC0945 线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒
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文献和实验消耗速率（OCR）降低后，可进一步定位电子传递链的功能异常。 线粒体呼吸链由复合体 Ⅰ‑Ⅳ 以及 ATP 合酶（复合体 Ⅴ）共同组成，通过检测各复合体的酶活，能够明确具体是哪一个复合体发生功能损伤。 常用检测手段有两种：一是分离纯化线粒体后，采用比色法测定复合体酶活；二是通过免疫捕获技术，分别检测复合体 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ 的活性。 注意要点：若实验已经同时观察到 ATP 水平下降与 OCR 降低，此时补充呼吸链复合体活性检测，相比单纯增加 ROS 相关指标，更有利于把机制研究向上游推进。 图5丨电子
指在生物体氧化还原中，参与电子传递的一系列氧化还原酶系，通常系指通过线粒体等的分子态氧氧化 NADH以及琥珀酸等的酶系。其电子传递顺序如下： O3 ←细胞色素（ a a3 ）复合体←细胞色素 c ←细胞色素 c1 但该顺序也表示每个前面物质的还原型将其后面物质的氧化型还原，这样反复进行，最终将分子态氧氧化成水。在呼吸链中有非血红素铁和铜原子等参与。在细胞内呼吸链系存在于线粒体的内膜上，各阶段的酶及因素可与不溶
Nature 重磅：林圣彩院士团队七年攻坚！首次破解「神药」二甲双胍作用靶点之谜
）处于中心位置，其同时也作为机体代谢稳态的主要调控因子。目前，二甲双胍通过抑制线粒体电子传递链的复合物 I 而激活 AMPK 已被广泛接受。然而，在他们的研究中却发现能量水平的下降只存在小鼠服用高剂量二甲双胍的个体，也就是说，低剂量的二甲双胍不会引起线粒体呼吸链复合体 I 的抑制以及 AMP/ATP 比值的升高。 因此，有必要深入探讨临床相关剂量的二甲双胍是如何激活 AMPK 的。通过一系列的生化实验和观察，他们发现临床剂量的二甲双胍能充分抑制溶酶体的空泡 H+-ATPase（v-ATPase
