- ￥1350 - 1950
- Solarbio
- 北京
- BC0940
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Mitochondrial Complex IV / Cytochrome C Oxidase Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC0940
- 规格：
25管/24样/50管/48样
| 规格： | 25管/24样 | 产品价格： | ￥1350.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50管/48样 | 产品价格： | ￥1950.0 |
线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC0940
规格：25T/24S、50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称/规格 | 25T | 50T | 保存条件 |
| 提取液 | 液体40 mL×1瓶 | 液体80 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 液体30mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1支 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×1支 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
工作液的配制：临用前取试剂一、试剂二、试剂三，将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。
50T溶液的配制：
- 工作液的配制：临用前取一瓶试剂一、一支试剂二和一支试剂三，将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
- 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。4 ℃ 600g离心10min。
- 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000g离心15min。
- 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
- 在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20%，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅳ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
- 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
- 将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育15min；用不完的试剂4℃可保存一周；
- 样本测定（在1mL玻璃比色皿中分别加入）
| 试剂名称 | 测定管 | 空白 |
| 样本（μL） | 40 | - |
| 蒸馏水（μL） | - | 40 |
| 工作液（μL） | 800 | 800 |
三、复合体Ⅳ活力单位的计算
按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr
V反总：反应体系总体积，1.05×10-3L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL； T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，需自行测定；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
注意事项：
- 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2小于0.2，可提高检测灵敏度；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。
- 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量（单独测量）。
- 本试剂盒试剂足够完成50管反应。
- 附:使用样本重量计算公式：（检测样本数为50T/24S）
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA上清×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=1099×ΔA上清÷W
ΔA上清：上清测定值；V反总：反应体系总体积，1.05×10-3L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05mL；V提取：加入提取液体积，1.0mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
B、沉淀中复合体Ⅳ活力的计算：
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA沉淀×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=440×ΔA沉淀÷W
ΔA沉淀：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，1.05×10-3L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05mL；V提取：加入提取液体积，0.4mL； W：样本质量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
C、样本复合体Ⅳ总活力的计算：
样本复合体Ⅳ总活力即为上清中复合体Ⅳ活力与沉淀中复合体Ⅳ活力之和。
按样本质量计算：复合体Ⅳ（U/g 质量）=1099×ΔA上清÷W+440×ΔA沉淀÷W
实验实例：
- 取0.1g兔肝脏进行样本处理，按照测定步骤操作，测得ΔA2=A1空白管-A2空白管=0.79-0.781=0.009，上清液的ΔA1=A1测定管-A2测定管=0.822-0.792=0.03，ΔA上清=ΔA1-ΔA2=0.03-0.009=0.021，沉淀中的ΔA1=A1测定管-A2测定管=0.992-0.792=0.2，ΔA沉淀=ΔA1-ΔA2=0.2-0.009=0.191，按样本质量计算：
沉淀中复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=440×ΔA沉淀÷W=440×0.191÷0.1 =840.4 U/g质量
则样本复合体Ⅳ总活力（U/g质量）=1099×ΔA上清÷W+440×ΔA沉淀÷W
=1099×0.021÷0.1+440×0.191÷0.1=1071.19 U/g 质量。
相关发表文献：
- Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)
- Huazhang Zhu,Weizhen Zhang,Yingying Zhao,et al. GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions. Molecular Neurodegeneration. November 2018;(IF8.274)
- Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2019, 134: 229-238.
- Bao Z, Xu X, Chao H, et al. ERK/Nrf2/HO-1 pathway-mediated mitophagy alleviates traumatic brain injury-induced intestinal mucosa damage and epithelial barrier dysfunction[J]. 2017.
- Li N, Qin S, Xie L, et al. Elevated Serum Potassium Concentration Alleviates Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury via Mitochondrial Preservation[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2018, 48(4): 1664-1674.
- Willis J H, Capaldi R A, Huigsloot M, et al. Isolated deficiencies of OXPHOS complexes I and IV are identified accurately and quickly by simple enzyme activity immunocapture assays[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2009, 1787(5): 533-538.
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Targeting Erbin-mitochondria axis in platelets/megakaryocytes promotes B cell-mediated antitumor immunity点击查看
| AuthorZilong Zhang, Xu Xu, Di Zhang, Songsong Zhao, Chuyi Wang, Guilin Zhang, Wenshu Chen, Jinglin Liu, Huimin Gong, Youlutuziayi Rixiati, Shi Li, Tong Shen, Jianming Li | Publish_toCell Metabolism |
| IF29.0000 | PMID38232736 |
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一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
文献支持
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