几丁质酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

几丁质酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0820
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体30 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体15mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体12 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体5mL×1瓶	2-8℃保存
试剂四A	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂四B	液体70mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：此试剂为悬浊液，使用前需摇匀；
2. 试剂三：饱和溶液，低温（2-8℃）条件取出会有晶体析出，60℃加热使其溶解即可；
3. 试剂四：临用前取一瓶试剂四A，加入32mL试剂四B中，充分溶解，现用现配。用不完的试剂2-8℃可以保存4周（试剂四B若有结晶可37℃促进溶解）；
4. 标准品：5mg N-乙酰氨基葡萄糖。临用前加入 1mL 试剂一配制成 5mg/mL 的标准溶液，即5000μg/mL的标准溶液，2-8℃可以保存4 周。

产品说明：
几丁质酶主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官（例如乌贼的软骨），以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶（EC 3.2.1.14）可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，N-乙酰氨基葡萄糖与碱共热产生的中间化合物可进一步与对二甲*甲醛反应产生显色物质，该显色物质在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 反应结束后尽快进行比色。
2. 吸光值大于1.5或者ΔA大于1时，样本用提取液适当稀释再测定或者缩短37℃酶促反应时间，注意计算公式修改；若ΔA小于0.01时，可以延长第一步37℃反应时间或者加大样本的加入量，注意修改计算公式。

实验实例：

1. 取0.111g虾壳加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定-A对照=0.767-0.008=0.759，带入标曲y=0.0087x+0.0021，得出x=87.0μg/mL，按样本质量计算酶活得：

几丁质酶活性（U/g 质量）=2.5×x÷W =1959.5 U/g 质量。

1. 取0.113g平菇加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定-A对照=0.918-0.01=0.908，带入标曲y=0.0087x+0.0021，得出x=104.126μg/mL，按样本质量计算酶活得：

几丁质酶活性（U/g 质量）=2.5×x÷W =2303.7 U/g 质量。
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