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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Micro β-amylase Assay Kit
- 库存:
99
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号:
BC2045-100T/48S
- 规格:
1100
β-AL)活性检测试剂盒说明书(DNS显色法)
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC2045
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 试剂一 | 液体35 mL×1瓶 | 常温保存 |
| 试剂二 | 液体10 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
- 试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;
- 试剂二:临用前取取1支试剂三加入到1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;
- 标准品:10 mg无水葡萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水配制成10 mg/mL的标准溶液,2-8℃保存两周。
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约0.1g样本,加入0.8mL蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取15min,每5min振荡1次,使其充分提取;6000g,常温离心10min,取上清液加蒸馏水定容至10mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
二、测定步骤
- 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到540nm,分光光度计蒸馏水调零。
- 标准液的稀释:将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的标准溶液。
- 标准液稀释可参考下表:
| 序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
| 1 | 10 | 50 | 950 | 0.5 |
| 2 | 0.5 | 200 | 200 | 0.25 |
| 3 | 0.25 | 200 | 200 | 0.125 |
| 4 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
| 5 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
| 6 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
| 7 | 0.015625 | 200 | 200 | 0.0078 |
- 取2支EP管分别加入75μL淀粉酶原液和淀粉酶稀释液,沸水浴5min,分别作为α-淀粉酶对照管和总淀粉酶对照管使用。
- 测定操作表:
| 试剂名称(μL) | α淀粉酶活力测定 | 总淀粉酶活力测定 | 标准曲线测定 | |||||||||
| 对照管 | 测定管 | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |||||||
| 淀粉酶原液 | 75(煮沸) | 75 | - | - | - | - | ||||||
| 蒸馏水 | - | - | - | - | - | 75 | ||||||
| 标准溶液 | - | - | - | - | 75 | - | ||||||
| 置于70℃水浴锅中准确反应15min,冷却至室温 | ||||||||||||
| 淀粉酶稀释液 | - | - | 75(煮沸) | 75 | - | - | ||||||
| 试剂二 | - | 75 | - | 75 | - | - | ||||||
| 置于40℃水浴锅中准确保温5min | ||||||||||||
| 试剂一 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | ||||||
| 试剂二 | 75 | - | 75 | - | 75 | 75 | ||||||
注意事项:
测定的吸光值大于1.5时,可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小,可以浓缩淀粉酶稀释液或者淀粉酶原液。
参考文献:
[1] Dziedzoave N T, Graffham A J, Westby A, et al. Influence of variety and growth environment on β-amylase activity of flour from sweet potato (Ipomea batatas)[J]. Food control, 2010, 21(2): 162-165.
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BC0700/BC0705 淀粉含量检测试剂盒
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文献和实验| AuthorGuangping Huang, Dunwu Qi, Zhisong Yang, Rong Hou, Wenyu Shi, Fangqing Zhao, Zitian Li, Li Yan, Fuwen Wei | Publish_toCONSERVATION BIOLOGY |
| IF6.3000 | PMID37650395 |
Cell Reports:复旦大学孙宁 / 李晓波团队发现 β-羟基丁酸对铁死亡的表观遗传学调控
急性肝脏衰竭 (ALF) 的患者并发急性胰腺炎 (AP) 早在 1973 年就被报道 1。到目前为止,文献报告的 ALF 患者中 AP 的发生率从 6% 到 41% 不等 2-5,然而其内在的病理生理学机制尚不清楚。 近日,复旦大学孙宁/李晓波团队联合海军军医大学杨田团队合作对这其中的机制进行了探索,结果表明,铁死亡在 ALF 中的胰腺损伤扮演了重要的角色。同时,ALF 导致的 β-羟基丁酸 (β-HB) 降低促进了胰腺组织的铁死亡。β-HB 能够修饰铁死亡抑制基因的组蛋白,使组蛋白 H3
直链淀粉 amylose 系与支链淀粉一起构成淀粉粒的主要成分(一般占20—25%),是吡喃葡萄糖仅以α-1,4-键连接的长键化合物,亦称β-直链淀粉。在水中不膨胀而溶解,但与热水不能形成典型的糊,冷却时与碘呈蓝色反应,分子量约5万。从溶于温水或稀酸的淀粉可溶部分加酒精沉淀而得到,其中也有极少的β-1,6-分支,在麦芽中的α-淀粉酶和β-淀粉酶(切断α-1,4键)以及异淀粉酶的共同作用下,可完全水解至麦芽糖。
能将淀粉水解成麦芽糖,由于麦芽糖能将3,5-二硝基水杨酸试剂还原成3-氨基-5-硝基水杨酸的橙红色化合物,且在一定范围内还原糖的浓度与反应液的颜色成正比,故利用比色法可求出麦芽糖的含量。以5分钟内每克样品水解产生麦芽糖的毫克数表示酶活性的大小。 植物淀粉酶可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶两种,其中β-淀粉酶不耐热,在温度70℃以上易钝化:而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下则发生钝化。根据以上特性,可分别测定这两种淀粉酶的活性。如测定α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性,即为淀粉酶总活性











