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- 2025年12月26日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 样本：
血清
- 库存：
大量
- 标记物：
HRP标记的抗重组抗原
- 适应物种：
人
- 应用：
可用于人血清中抗重组抗原（来源于JEV）的IgM抗体的检测
- 检测方法：
ELISA
- 检测范围：
定性
- 供应商：
深圳市科润达生物工程有限公司
- 规格：
96T
乙脑病毒IgM检测试剂盒（酶联免疫法）
乙脑病毒IgM检测试剂盒产品名称
乙脑病毒IgM检测试剂盒预期用途
乙脑病毒IgM检测试剂盒检测原理
乙脑病毒IgM检测试剂盒组成成分
JE IgM ELISA试剂盒包含了足够用于96孔的试剂。此试剂盒包含的成分有：
JE IgM检测用的特定材料：
■ 终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应，2-8℃下贮存备用。
警告：强酸；穿保护手套、面罩和戴安全眼镜，弃置所有材料均应按照安全条例与规则进行。
乙脑病毒IgM检测所需材料（试剂盒内未提供）
乙脑病毒IgM检测试剂盒检测步骤
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乙脑病毒IgM检测试剂盒产品名称
| 中文名称 | 乙脑病毒IgM检测试剂盒 |
| 英文名称 | JE DetectTM IgM ELISA |
| 产品货号 | JEMS-1 |
| 产品规格 | 96T |
| 检测样本 | 血清 |
| 适应物种 | 人 |
| 预期用途 | 可用于人血清中抗重组抗原（来源于JEV）的IgM抗体的检测 |
| 产品品牌 | 美国Inbios |
| 供应商家 | 深圳市科润达生物工程有限公司 |
乙脑病毒IgM检测试剂盒预期用途
乙脑病毒IgM检测试剂盒可用于人血清中抗重组抗原（来源于JEV）的IgM抗体的检测。这一检测有助于人是否感染了JEV的诊断。此试剂盒并不用于血液或血液成分的筛查，且该试剂盒尚未针对疫喵诱导的血清转化研究进行优化，因而仅供专业人士和体外诊断用。
乙脑病毒IgM检测试剂盒检测原理
JE检测MAC-ELISA由一种酶促扩增的“两步”夹心式免疫测定法组成。在测试中，JE阴性质控，阳性质控和使用样本稀释液稀释的未知样本首先加入到包被有抗人IgM的微孔板上进行温育，洗板之后分别与JEV衍生的重组抗原（JERA）和正常细胞抗原（NCA）一起温育。再次洗板后加入HRP标记的抗乙脑抗体。洗板，加入TMB作为显色剂，一段时间后加入硫酸以终止底物反应。所形成的颜色深度与样本中的特异性抗体成正比。当吸光度高于一定值时，JERA和质控品的吸光率可准确地测定JEV抗体是否存在。
乙脑病毒IgM检测试剂盒组成成分
JE IgM ELISA试剂盒包含了足够用于96孔的试剂。此试剂盒包含的成分有：
JE IgM检测用的特定材料：
■JEV人IgM检测用微孔板：包被有抗人IgM抗体的96孔聚苯乙稀微孔板，在2-8℃下储存备用，包被了抗人IgM的微孔可用来捕获人样品中的IgM抗体。
■IgM样品稀释液：25ml ，1瓶，2-8℃下贮存，即用。
注意：如果稀释液出现沉淀，先旋涡混合再使用。
注意：如果稀释液出现沉淀，先旋涡混合再使用。
■JE IgM 阳性质控：1支50μl热灭活灭活血清。JE IgM阳性质控用于辅助监测试剂的完整性。2-8℃下储存至使用。在使用前短暂地迅速摇匀试剂，以收集瓶底的成分。
■JE阴性质控：1支50μl热灭活血清，JE阴性质控用于辅助监测试剂的完整性，2-8℃下储存至使用。在使用前短暂地迅速摇匀试剂，以收集瓶底的成分。
注意：若需长时间储存（＞1周）血清应分装储存在-70℃或-20℃。
■JE抗原（JERA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下贮存，即用
■正常细胞抗原（NCA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下贮存，即用
■10X的洗涤液：1瓶120ml，在整个过程的洗板步骤中120mL的洗涤液将被使用，在2-8℃下储存。
■Enwash:1瓶，20ml，Enwash在加酶联物后的洗板程序之间使用，在2-8℃下贮存备用。
■用于JE IgM检测的即用型 HRP酶标物：1瓶, 6ml，内含预稀释好的HRP黄热病毒活性单克隆抗体，在2-8℃下贮存备用。
注意该试剂任何时候都应该在避光条件下保存。
注意该试剂任何时候都应该在避光条件下保存。
■TMB底物液： 1瓶，9ml，在2-8℃下贮存备用。
注意：底物液应时刻存放于试剂盒所提供的避光瓶里。■ 终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应，2-8℃下贮存备用。
警告：强酸；穿保护手套、面罩和戴安全眼镜，弃置所有材料均应按照安全条例与规则进行。
乙脑病毒IgM检测所需材料（试剂盒内未提供）
| ★ | 能够在450mn处测定吸光度的酶标仪 |
| ★ | 生物学的或高纯度水 |
| ★ | 真空泵、洗板机 |
| ★ | 37℃孵箱 |
| ★ | 1-10μl单头的移液管，50-200μl单头及多头的移液管 |
| ★ | 聚丙烯试管 |
| ★ | Parafilm封口膜 |
| ★ | 计时器 |
| ★ | 混合器 |
乙脑病毒IgM检测试剂盒检测步骤
1.阳性质控，阴性质控应在乙脑重组抗原和正常细胞抗原试验中做双孔检测。未知样本可以做单孔或双孔检测，但乙脑重组抗原和正常细胞抗原试验中都必须检测，一个96孔板最多可检测44个样本，具体可参考本节末尾的流程图。
2、标记好试验所需包被板
3、用所提供的样品稀释液将待测血清和质控稀释至1/100，用小聚苯乙烯软管完成稀释。至少使用4ul的血清样品，阴性、阳性质控。例如4µl的血清加入396µl的样品稀释液配制出1/100的稀释液。
4、用多头或单头的移液管将稀释的样品，阴性质控，阳性质控各50ul加入相应的微孔中，以下加入44份测试血清的范例
5、 用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是不需要覆盖的。
注意：这样是为了保证温度均匀的分布在每个孔的底部和边缘。一旦顶部密封阻碍了蒸发，任何多余的封板胶必需被剪掉。
6. 37℃下保湿温育板条1小时。
注意：不要将微孔板板条的顶部叠起，必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体，不要让板条接触任何湿润的物质，如湿纸巾等。详见英文说明书。
注意：这样是为了保证温度均匀的分布在每个孔的底部和边缘。一旦顶部密封阻碍了蒸发，任何多余的封板胶必需被剪掉。
6. 37℃下保湿温育板条1小时。
注意：不要将微孔板板条的顶部叠起，必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体，不要让板条接触任何湿润的物质，如湿纸巾等。详见英文说明书。
7.孵育后，使用自动洗板机用1X 的洗涤缓冲液洗板6次，每孔300ul
8.用多头的移液器在A-D列加入50ul的乙脑重组抗原，E-H列加入50ul的正常细胞抗原；以下为加入JERA和NCA的应用范例：
9.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖的。
10.在孵育器中37℃下温育板条1小时
11.在温育后，用自动洗板机洗板6次，每次洗板时每孔使用300µl的洗涤液
12.用多头的移液器每孔加入50µl的HRP标记的酶联物
13用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖
14.在37℃下避光温育板条1小时
15.温育后，使用洗板液，用自动洗板机洗板6次。
16.用头多的移液器在每孔中加入150µl的Enwash
17.不用封板，在室温下温育5分钟
18.在温育后，使用1X的洗板液，用自动洗板机洗板6次
19.用多头的移液管每孔加入75µl的液态TMB底物液。
20.不用封板，将微孔板在室温下避光静置10分钟。
21.用多头的移液管在每孔中加入50µl的终止液，不用封板，在室温下孵育1min。
22.用酶标仪在450nm处读取OD值， 请确保酶标仪不会减去或标准化任何空白值或孔。
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文献和实验相关实验
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医院检验室对梅毒感染的早期检查，但耗时比TRUST长，需要酶标仪、洗板机。其主要缺点该法检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体，梅毒IgG抗体治愈后相当长的时间内仍然存在较高的阳性率，甚至终身阳性，因此，TP-ELISA阳性只说明正在感染或曾经感染过，不能判断梅毒疾病活动与否，所以不能作为疗效监测手段。故对梅毒的诊断必须结合临床表现，否则，可能导致临床误诊，同时增加患者的心理负担。若试剂生产商能生产TP-ELISA法梅毒IgG和IgM抗体独立检测试剂盒应用于临床，则更有价值。 ③
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