碘化丙啶(PI)染液(即用型)

特别提示：包括碘化丙啶(PI)染液(即用型)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：碘化丙啶(PI)染液(即用型)
英文名称：PI Staining Solution (Ready-to-use)
产品货号：SY0582
产品规格：150T

本品是无菌的即用型PI染色液（溶于PBS），可进入死细胞内与DNA结合，并被活细胞排斥在外，适合用于流式细胞仪进行细胞活力分析。PI单染用FL2通道检测，若与FITC或PE标记抗体/蛋白联合使用FL3通道检测。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基对之间实现与双链DNA结合。PI经488 nm荧光激发，产生相对较大的斯托克司频移后，并在617 nm处具有最大发射波长。另外，PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用以上特性，PI可作为细胞活力分析的荧光探针之一。不仅可单独使用；也可以同Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定。也能够与488 nm激发的荧光素如FITC和PE等联合使用。

使用方法
1）收集细胞，计数，最高以1 x 106 cells/100 μl的量加入FACS分选管；
2）加2ml PBS（或HBSS）清洗细胞，300 x g离心5 min，去上清。重复一次。
注：若需要用抗体标记表面抗原，可在此步之后进行。PI不适合与检测胞内分子的抗体联合使用。
3）细胞清洗后，用100 μl流式细胞染色缓冲液（flow cytometry staining buffer）重悬细胞；加入10 μl PI染色液，轻柔混匀，冰上或者室温避光孵育10-15 min。
4）直接上机进行流式分析。注：PI染色后不可再清洗细胞。PI染色孵育后尽快上机检测。

注意事项
1）碘化丙啶（PI）是已知的诱变剂，操作过程中一定要做好防护工作避免与PI的直接接触。另外PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。
2）流式细胞染色缓冲液可配制如下：1×PBS (w/o Ca2+ and Mg2+) + 0.5-1% BSA（或 5% FBS）＋0.1% 叠氮钠。也可根据实验室自身体系调整。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：4℃，有效期半年

除了碘化丙啶(PI)染液(即用型),，我公司还供应以下相关产品：



名称：TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒
货号：BTN90605B
规格：5次
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3′突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和Digoxin标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带Digoxin标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定最佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯*抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。