高效拭子基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括高效拭子基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高效拭子基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Efficient Extraction kit for genomic DNA from swab
产品货号：WH0215
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附膜和独特的缓冲液系统，离心吸附板中采用的硅基质材料为新型材料，能够从口腔拭子、咽拭子以及漱口水等多种口腔样本中高效、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

组分	50次	200次
组织消化液GHA	30ml	120ml
缓冲液GBS	15ml	60ml
去蛋白液RD	24ml	90ml
漂洗液PWE	25ml	50ml
洗脱缓冲液TB	15ml	30ml
Proteinase K	500μl	2×1ml
吸附柱CB2	50个	200个
收集管（2ml)	50个	200个
离心管（1.5ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配试剂：口拭子样本保存液（目录号：WH0214）

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
2．若缓冲液GBS中有沉淀，可在室温中重新溶解，摇匀后使用。
3．如果样本不能及时提取，可保存在口拭子保存液中（目录号：WH0214），长期保存不会影响提取效果。

操作步骤
使用前请先在缓冲液GBS中加入异丙chún；在去蛋白液RD和漂洗液PWE中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料：
1）口腔拭子样本提取
  将在面颊内擦拭过的拭子转移到2ml离心管中，加入500μl缓冲液GHA。加入10 μl Proteinase K溶液，涡旋10 sec混匀，65℃放置15-30 min，每隔10min涡旋混匀数次,取出300-350 μl进行后续实验。
2）咽拭子样本提取
  将在咽部擦拭过的拭子转移到5 ml离心管中，加入1 ml-2ml的组织消化液GHA，颠倒混匀。在提取前取出300-350 μl的样品，加入10 μl Proteinase K溶液，涡旋10 sec混匀，65℃放置30 min，每隔10min涡旋混匀数次。
3）唾液样本提取
  按照要求取出唾液样本，加入等体积的缓冲液GHA，颠倒混匀。在提取前取出300-350 μl的样品，加入10 μl Proteinase K溶液，涡旋10 sec混匀，65℃放置30 min，每隔10min涡旋混匀数次。
  注意：如果样本已经保存在其他厂家的样品保存液里，加入样品1/2体积的组织消化液GHA和10 μl Proteinase K溶液，涡旋10 sec混匀，65℃放置15-30 min，取出300-350 μl进行后续实验。提取咽拭子样本和唾液样本时，若组织消化液GHA不足，需另行购买。
2．加入500μl缓冲液GBS（使用前请先检查是否已加入异丙chún），充分颠倒混匀，室温放置5 min。
3．将上一步所得溶液都加入一个吸附柱CB2中（吸附柱CB2放入收集管中），12000rpm（~13400×g)离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放回收集管中。
4．向吸附柱CB2中加入500μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放回收集管中。
5．重复操作步骤4一次。
6．向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PWE（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放回收集管。
7．重复操作步骤6一次。
8．12000rpm （~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB2室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9．将吸附柱CB2转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min。
10．将溶液收集到离心管中，并于适当条件保存。

DNA浓度及纯度检测：
·得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
· DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
· OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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