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朗智(上海)生物科技有限公司
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肿瘤浸润免疫细胞检测
小鼠肿瘤消化成单细胞悬液后,多色流式分析淋巴系亚群(T/Th/Tc/B/NK/Treg)的比例。
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文献和实验用体外或体内试验对机体的各种参与免疫应答的细胞进行鉴定、计数和功能测定,藉以了解机体的免疫状态,并对某些临床疾病的诊断,预后及疗效观察等也具有一定意义。� 一、免疫细胞的分离� 体外测定免疫细胞首先要从外周血或淋巴组织中分离所需的细胞。其主要方法是根据细胞的表面标记、理化性状及功能等方面的差别进行设计。常用的方法有密度梯度离心法辅以花环沉降或亲合板粘附法(panning)等。目前最先进的方法是用荧光激活细胞分离仪
红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量 【基本原理】 采用戊二醛交联技术将McAb或兔抗鼠IgG与羊红细胞(SRBC)结合,制成致敏的SRBC。抗体致敏的SRBC可与T淋巴细胞直接或间接结合,在T淋巴细胞周围形成花环。通过计数花环形成率,从而确定T淋巴细胞各亚群。该方法可分为直接红细胞花环法和间接红细胞花环法。现以间接花环法为例。 【试剂及材料】 (1) 醛化二抗致敏的SRBC (2)
离心3min,弃上清; 2. 分别加入荧光素标记的抗CD的mAb 20ml,混匀; 3. 4℃孵育60min, 加入细胞洗液 , 1500r/min离心3min,反复洗涤3次; 4. 用细胞洗液恢复体积至0.5ml,加入固定液20ml,混匀; 5. 上机检测。 注意事项 由于FITC(或PE)标记的抗CD的mAb可以从试剂公司方便购得,且方法稳定可靠,故在此介绍的是直接免疫荧光法的操作步骤。当然,也可采用间接直接免疫荧光法,操作方法同前。
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