肿瘤浸润免疫细胞检测

免疫细胞的检测方法

  用体外或体内试验对机体的各种参与免疫应答的细胞进行鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断，预后及疗效观察等也具有一定意义。�     一、免疫细胞的分离� 体外测定免疫细胞首先要从外周血或淋巴组织中分离所需的细胞。其主要方法是根据细胞的表面标记、理化性状及功能等方面的差别进行设计。常用的方法有密度梯度离心法辅以花环沉降或亲合板粘附法(panning)等。目前最先进的方法是用荧光激活细胞分离仪

红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量

红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量   【基本原理】     采用戊二醛交联技术将McAb或兔抗鼠IgG与羊红细胞（SRBC）结合，制成致敏的SRBC。抗体致敏的SRBC可与T淋巴细胞直接或间接结合，在T淋巴细胞周围形成花环。通过计数花环形成率，从而确定T淋巴细胞各亚群。该方法可分为直接红细胞花环法和间接红细胞花环法。现以间接花环法为例。 【试剂及材料】 （1）         醛化二抗致敏的SRBC （2）        

流式细胞仪术检测各类免疫细胞的数量

离心3min，弃上清； 2. 分别加入荧光素标记的抗CD的mAb 20ml，混匀； 3. 4℃孵育60min， 加入细胞洗液 ， 1500r/min离心3min，反复洗涤3次； 4. 用细胞洗液恢复体积至0.5ml，加入固定液20ml，混匀； 5. 上机检测。 注意事项 由于FITC（或PE）标记的抗CD的mAb可以从试剂公司方便购得，且方法稳定可靠，故在此介绍的是直接免疫荧光法的操作步骤。当然，也可采用间接直接免疫荧光法，操作方法同前。