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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
430
- 英文名:
Animal Cell Lysis Solution(B)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输、4℃
- 规格:
100mL
特别提示:包括动物细胞裂解液B(变性)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:动物细胞裂解液B(变性)
英文名称:Animal Cell Lysis Solution(B)
产品货号:BTN80807B
产品规格:100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:
1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:
一:处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索最佳用量。
4. 冰上放置10-30分钟(最佳时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:处理悬浮细胞
1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同第一步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,最好留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:处理组织块
1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
6. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
除了动物细胞裂解液B(变性),,我公司还供应以下相关产品:
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN100302 | 包涵体蛋白溶解及复性套装 | 100次 |
| BTN130526 | 细菌专用蛋白酶抑制剂 | 1mL |
| YT611 | RIPA裂解液(弱) | 100ml |
| SNM416 | 膜蛋白和胞质蛋白提取试剂盒 | 50T |
| SNM432 | WB洗涤液(10×) | 100ml |
| SNM490 | TBS缓冲液(20×) | 500ml |
| SNM493 | 防脱载玻片(经多聚赖氨酸处理) | 50片 |
| RFT159 | 细菌蛋白提取试剂盒 | 100次 |
| KFS004 | 柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40X) | 125ml |
| KFS227 | ICAD蛋白检测试剂盒 | 50T |
| SY0329 | E-64蛋白酶抑制剂 | 5mg |
| SY0351 | 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液 | 2ml |
| SY0356 | 4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液,pH6.8 | 250ml |
| SY0436 | 人β-淀粉样多肽 1-42 | 1mg |
| SY0453 | 牛血清白蛋白(无DNase、蛋白酶、IgG) | 25g |
| ZN2924 | Tris-glycine-SDS电泳缓冲液(10X粉剂) | 10L |
| QN1105 | 剥离硅* | 200ml |
| QN1162 | DAB法显色试剂盒(小鼠IgG) | 1盒 |
| QN1252 | 4%*聚甲醛 | 100mL|500mL |
| QN1286 | 变性蛋白预制胶(10%) | 10块 |
| HR0023 | 胞质蛋白提取试剂盒 | 50T/100T |
| HR0141 | 线粒体蛋白提取试剂盒 | 50T/100T |
| HR0049 | 脂肪组织蛋白提取试剂盒 | 50T/100T |
| HR8057 | 植物蛋白提取试剂盒(去叶绿素) | 50T/100T |
| HR8136 | Western转移缓冲液(5×),NC | 500ml |
| HR8169 | 蛋白脱脂肪柱 | 1个 |
| GL2506 | 超氧化物歧化酶(SOD)提取液 | 500ml |
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文献和实验一、实验目的 1.深入了解蛋白质的变性作用的含义。 2.掌握常用蛋白质变性剂的种类。 二、实验原理 天然蛋自质分子中的肽链以一定的方式盘绕曲折,形成特定的构象。这种构象的维持,主要依赖于蛋白质分子中的氢键。尿素能破坏氢键,导致蛋白质分子结构松弛,使蛋白质变性,变性后,蛋白质的肽链就伸展开来,从而使原来包藏在分子内部的-SH 暴露,能与巯基试剂作用,在一定范围内,暴露的-SH 随着变性程度的加深而增加,因此测定
提取样品的总RNA后,一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构,因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳,得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。一、试剂:DEPC(Sigma公司产品),MOPs(Bocherigmer公司产品),甲酰胺(Formamide,Sigma公司产品),溴酚蓝(Bromphenol Blue,Sigma公司产品)。EDTA-Na2,氢氧化钠,醋酸钠,甲醛,甘油,分析纯,国产。二、试剂配制:1、DEPC 水的处理:用量筒量取去离子水2L
在细胞的生活过程中,因某种原因的作用,使正常的物质代谢发生显著变化或蒙受障碍,由于异常物质的出现,在细胞中产生形态学上可见的变化,这种现象称为变性。一般多用于医学。有的虽改称退化,但因有时出现机能异常亢进,所以多用变性一词。根据占变性过程一半的代谢异常或障碍的种类,变性可作如下分类:( 1)由于蛋白质代谢异常(混浊肿胀、空泡变性、粘液变性、胶质变性、玻璃样变性、淀粉样变性、角质变性)引起的变性;( 2)由于脂肪代谢异常(脂肪变性)引起的变性;( 3)由于糖代谢异常(糖元质变性
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