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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过4607个月
- 规格:
50ug/100ug
- 物种Homo sapiens (Human,人) 相同的名称,不同的物种。
- 来源原核表达
- 宿主E.coli
- 内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
- 亚细胞定位细胞膜, 细胞质
- 预测分子量26.9kDa
- 实际分子量27kDa(差异分析请参阅说明书)
- 片段与标签Ala27~Lys235 with N-terminal His Tag
- 缓冲液成份100mM NaHCO3, 500mM NaCl缓冲液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
- 性状冻干粉
- 纯度> 95%
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文献和实验为非溶性蛋白,也可被单克隆抗体柱层析,重新还原的产物可以被抗Derpl血清识别,其结合率优于pGEX克隆产物。为了减少繁琐,表达更好的重组蛋白,有人尝试以Der p1的原酶和酶原放人同一酵母载体表达,效果良好。 3.哺乳动物表达 构建一个扩大的载体PEE6.HCMV.GS,从中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达Derpl和Derp2。人巨细胞病毒(CMV)启动子(ACMD)和谷胱甘肽合成酶基因,通过放大质粒拷贝数增加细胞内酶高效表达,以控制抗代谢产物硫代甲硫氨酸
表面,防止蛋白酶降解。 (3)分泌 5、宿主细胞:1) 质粒拷贝数 2)转录翻译效率 3)产物稳定性。 6、环境条件等: (1)诱导剂的使用。 (2)培基成份,碳源、能量、营养、PH等。 (3)发酵时不同培育时间和诱导时间。 (4)生长温度可影响基因表达速率和质粒拷贝数。 六、外源基因在大肠杆菌中的 可溶性表达 (一) 包涵体产生原因 1、重组蛋白本身特性 2、二硫键形成的氧化还原环境不佳 3、重组蛋白过渡表达 4、宿主菌缺失蛋白折叠和运输所需的一些酶和辅助因子 5、重组蛋白
的表达系统会造成质粒的不稳定,细胞生长速度的下降和重组蛋白产量的降低[32,33]。Lanzer和Bujard曾对常用的lac启动子-操纵子系统进行了广泛的研究,证明操纵子放在启动子序列的不同位置会造成70倍差异的抑制。将17bp的操纵子置于-10和-35六聚体区之间所形成的抑制比将其放在-35区的上游或-10区的下游要高50-70倍[34]。 启动子的第三个特性是其简便和廉价的可诱导性。大量生产蛋白质最常用的启动子是热诱导(λPL)和化学诱导(trp)启动子。异丙基硫代-β-D-半乳糖
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