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- 上海雅吉生物科技有限公司
- 中国
- Hy2011GO
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温保存
- 保质期：
一年
- 库存：
20
- 供应商：
雅吉生物
- 规格：
2×200ml/KIT
产品货期：3天
产品保存：常温保存
产品规格：200ml/Kit
产品详细说明：联系客服免费索取
产品组成：内容如下：
名称 规格
A 分离液 200ml
B 样本稀释液（赠品） 200ml
C 清洗液（赠品） 200ml
D 说明书 1 份
【实验前准备】
1. 适用仪器
最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
2. 抗凝剂的选择 在动物实验采血时，很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血，医用采血管中的抗凝
剂只考虑血浆质量，但不利于高纯度细胞分离实验。
为此，我公司特别开发出专利抗凝剂及抗凝管专用于细胞分离，改变使用普通采血管 获得抗凝血分离效果不佳，提取率及纯度低下的不良结果。
序号 产品名称 规格
1 细胞分离专用抗凝剂 100ml
200ml
500ml
2 实验动物一次性使用负压采血管（随试剂盒附赠 5 支） 5ml/支
3. 无菌硅化离心管
4 . 无菌硅化离心管/10mL（随试剂盒附赠 5 支） 100 支/包
羊外周血单核细胞分离液试剂盒检验方法：
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
首先取抗凝血按体积比 1:1 的比例与样本稀释液混匀，根据 稀释后的样本量大小，分以下两种情况：
情况 A：稀释后的血液样本量小于 5ml 时，实验方法如下：
1. 取一支离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。
2. 用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min（注： 根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离 心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴 细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，往所得离心管中 加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
5. 250g，离心 10min。
6. 弃上清。
7. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
8. 250g，离心 10min。
9. 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。 情况 B：稀释后的血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：
1. 取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。
2. 将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上，550-650g（最大离心力可至 1000g）， 离心 20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心 时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样 本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
3. 剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 至步骤 9。
羊外周血单核细胞分离液试剂盒分离图例：
【注意事项】
1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最 好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后 分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。
3. 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。
4. 吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
5. 如所实验后细胞得率或活性过低，请联系我公司技术支持以寻求帮助，具体联系方式 详见下方生产企业信息。
【储存条件及有效期】
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】 本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
红细胞 白细胞 血小板
含量（个/L）
（4.0-5.5）×1012 （4.0-10.0）×109
（1.0-3.0）×1011
中性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
50%-70% 20%-40% 3%-8%
【相关实验技术方案】
1. 所获得淋巴细胞的培养技术。
2. 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。
3. 所获得淋巴细胞的鉴定方法 A.流式细胞技术 B.免疫组化技术 C.原位杂交技术
D.PCR 技术
羊外周血单核细胞分离液试剂盒可能存在的问题及解决方法：
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
出现情况 出现原因 建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 转速过小或离心时间过短
适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中 转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散 细胞密度过大
调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见 细胞密度过小
2. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地 区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离 心时间，对离心转速进行调整。
3. 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果， 离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
欢迎新老客户咨询订购：羊外周血单核细胞分离液试剂盒
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文献和实验流式课堂 | 裂红 or 分离液？外周血不同制备方法应用场景
、粒细胞等），需要裂解红细胞；倘若检测的是红细胞，不需要裂解红细胞； ⊙ 如果后续样本不用于流式分析，而是需要培养或者冻存复苏，使用裂红后培养的细胞，活性可能会打折扣。 Ficoll 密度梯度离心法 01 原理 根据细胞的沉降系数差异，借助细胞分离液和离心操作，对细胞进行分离。 02 优点 ⊙ 获得的细胞更纯净，有利于细胞培养后检测胞内因子 ⊙ 可将细胞冻存后再复苏、培养、检测 ⊙ 去除死细胞 03 缺点 ⊙ 步骤复杂，需 30min 以上 ⊙ 取白膜层需要丰富的经验 ⊙ 只能获得淋巴细胞和单核细胞
核细胞分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜，故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞，并进行适当的清洗，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC。 2 方法 1） 取新鲜抗凝
人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移
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