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- 库存:
289
- 英文名:
DNA extraction kit from animal-derived feedstuffs
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
RT(15-25℃)干燥条件下,可
- 规格:
50次|200次
特别提示:包括动物源性饲料DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:动物源性饲料DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:DNA extraction kit from animal-derived feedstuffs
产品货号:WH0023
产品规格:50次|200次
本试剂盒可从多种动物源性植物饲料或动物组织中提取基因组DNA。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规操作,包括PCR、荧光定量PCR等饲料安全检测应用。
产品特点:
·针对性强:与饲料检疫部门合作开发的专项产品。
·应用广泛:可用于多种饲料和动物组织。
·得率高、检测灵敏度高:可从50mg饲料中提取到500ng-40μg基因组DNA,检测灵敏度可达0.1%。
试剂盒组成:
| 组分 | 50T | 200T |
| 缓冲液GA | 30ml | 2×50ml |
| 缓冲液GB | 30ml | 2×50ml |
| 缓冲液GD | 13ml | 52ml |
| 漂洗液PW | 15ml | 50ml |
| 洗脱缓冲液TE | 15ml | 60ml |
| Proteinase K | 1ml | 4×1ml |
| 吸附柱CB3 | 50个 | 200个 |
| 收集管(2ml) | 50个 | 200个 |
保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
选配试剂:RNase A(100 mg/ml)(目录号:WH0217)。
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。
2.所有离心步骤均为室温下离心。
使用方法:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.处理材料:
50mg研磨粉碎的动物源性饲料加入320μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮。
注意:如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)(客户自备,目录号:WH0217)溶液,振荡15 sec,室温放置5 min。
2.加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。在65℃放置20-30 min,其间混匀样品2-3次。
3.加入340 μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,65℃放置10min,其间混匀样品2-3次。
注意:如果第2、3步中65℃温浴期间离心管底出现沉淀,请将沉淀振荡至彻底悬浮后再进行65℃水浴操作。
4.12000rpm (~13400×g)离心2 min,取440 μl上清至新管中。
注意:若所取上清中有可见悬浮颗粒,请重复步骤4一次,否则颗粒物质会堵塞吸附柱。
5.向上清中加入220 μl无水乙醇,充分颠倒混匀6-8次,此时可能会出现絮状沉淀。
注意:若所取上清体积小于或大于440 μl,则无水乙醇应加到上清体积的1/2。例如:取500 μl上清,加入250 μl无水乙醇。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀全部加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
注意:离心时间请不要少于2 min,否则可能会导致吸附柱堵塞,如果离心时出现吸附柱堵塞情况时,请再次12000rpm(~13400×g)离心2 min。
7.向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
8.向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。
注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
DNA浓度及纯度检测:
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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文献和实验活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。♦ 产品特点:1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2. 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需
其基本原理是:以PCR(聚合酶链式反应)为基础,结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增),再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。 一、 实验
很多植物DNA提取试剂盒成分也是CTAB。CTAB法是提取植物DNA非常经典方法,但在提取的过程中由于要在65℃水浴中放置1个小时,因此耗时较长。我们在使用该法提取桃DNA时,获得DNA中含有大量的蛋白和多糖,虽然通过多次的苯酚氯仿抽提可以大部分去除,但DNA得率较低。在这里给大家分享一种快速获取植物高质量DNA的方法,供大家在提取植物DNA时作为参考,用该法提取的植物DNA完全满足后续酶切、BAC文库构建、高通量测序大片段文库构建,将该法称之为月桂酸钠法。 月桂酸钠抽提缓冲液: Tris
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