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文献和实验/RealTime PCR扩增的技术进步,很多样品的需求量大大减少,几百个纳克到几个微克足够,而最常见的离心柱型小量提取,正好可以提取几个微克到十几微克的样品。完全可以满足下游试验的需要。 2. 离心柱操作不使用苯酚,氯仿有毒害物质。方便快捷,裂解后配合蛋白酶K消化,过柱子,漂洗,洗脱,几个简单步骤就可以完成全部过程。适合于标准化高通量操作,对操作技巧要求低,即使初学者提取也可以得到稳定的结果。 3. 联合的蛋白酶K消化,和漂洗,可以确保了高纯度的可能性。是目前所有方法中,纯度最高的一种全血DNA
真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2)RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取,也可以用 Trizol 法提取,建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1(也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀)。 具体操作:取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中,加入 800 μl Trizol 试剂,充分混合,裂解 10 min,12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3)反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒:适用于长片段 RNA(如 mRNA、LncRNA
备0.04M的EDTA溶液,每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃,一般2-3年内均可以提取,保存时间越短,提取的质量越高,最好在2个月内提取。II. DNA提取方法的选择:全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种(比如Qiagen、 Promega、Bioteke;摒弃酚氯仿手提的方法,时间长毒性大),原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号,让人不知如何去选择,但从原理 和操作步骤看,基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说,离心
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