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- 2025年07月07日
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上海一研
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低温冷藏
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50T
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增（扩增区）
1) 仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ） 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。【试剂盒使用注意事项】
1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。
2. 本试剂盒仅用于体外检测。
3. 实验请严格分区操作：
第一区：PCR前准备区 — 准备扩增所需试剂；
第二区：样本处理区 — 待测样本和对照品处理；
第三区：检测区 — PCR扩增检测。
4. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台；
5. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。
6. 在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。
7. 分装有反应液的检测板或装入密实袋内再转移至样本区。
8. 加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快封上封板膜。
9. 扩增完毕立即取出检测板，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
10. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
11. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
12. 工作台及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外灯进行消毒。
Human IGFBP-6 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6) ELISA Kit人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IGFBP-6 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6) ELISA Kit
Human INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit人胰岛素受体(INSR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit
Human APC (Activated Protein C) ELISA Kit人活化蛋白C(APC)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human APC (Activated Protein C) ELISA Kit
Human APLN (Apelin) ELISA Kit人Apelin蛋白(APLN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human APLN (Apelin) ELISA Kit
Human AP13 (Apelin 13) ELISA Kit人Apelin 13蛋白(AP13)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AP13 (Apelin 13) ELISA Kit
Human AP36 (Apelin 36) ELISA Kit人Apelin 36蛋白(AP36)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AP36 (Apelin 36) ELISA Kit
Human Apo A1-Ab (Anti-Apolipoprotein A1 Antibody) ELISA Kit人抗载脂蛋白A1抗体(Apo A1-Ab)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human Apo A1-Ab (Anti-Apolipoprotein A1 Antibody) ELISA Kit
Human LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit人脂质运载蛋白1(LCN1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书人preptin elisa试剂盒人preptin试剂盒规格型号：96T/48T人preptin试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人preptin试剂盒、人preptin elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
鸡血管活性肠肽elisa试剂盒鸡血管活性肠肽试剂盒规格型号：96T/48T鸡血管活性肠肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：鸡血管活性肠肽试剂盒、鸡血管活性肠肽elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
鸡免疫球蛋白M elisa试剂盒鸡免疫球蛋白M试剂盒规格型号：96T/48T鸡免疫球蛋白M试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：鸡免疫球蛋白M试剂盒、鸡免疫球蛋白M elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔一elisa试剂盒兔一试剂盒规格型号：96T/48T兔试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔试剂盒、兔一氧化lisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔子层连蛋白elisa试剂盒兔子层连蛋白试剂盒规格型号：96T/48T兔子层连蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子层连蛋白试剂盒、兔子层连蛋白elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔子白三烯B4 elisa试剂盒兔子白三烯B4试剂盒规格型号：96T/48T兔子白三烯B4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子白三烯B4试剂盒、兔子白三烯B4 elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒人组织相容性2-K1-K区试剂盒规格型号：96T/48T人组织相容性2-K1-K区试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人组织相容性2-K1-K区试剂盒、人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
| 产品名称 | 规格 | 分类 |
| 大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书 | 50T | PCR检测试剂盒 |
1) 仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ） 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。【试剂盒使用注意事项】
1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。
2. 本试剂盒仅用于体外检测。
3. 实验请严格分区操作：
第一区：PCR前准备区 — 准备扩增所需试剂；
第二区：样本处理区 — 待测样本和对照品处理；
第三区：检测区 — PCR扩增检测。
4. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台；
5. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。
6. 在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。
7. 分装有反应液的检测板或装入密实袋内再转移至样本区。
8. 加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快封上封板膜。
9. 扩增完毕立即取出检测板，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
10. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
11. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
12. 工作台及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外灯进行消毒。
Human IGFBP-6 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6) ELISA Kit人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IGFBP-6 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6) ELISA Kit
Human INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit人胰岛素受体(INSR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit
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大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书人preptin elisa试剂盒人preptin试剂盒规格型号：96T/48T人preptin试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人preptin试剂盒、人preptin elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
鸡血管活性肠肽elisa试剂盒鸡血管活性肠肽试剂盒规格型号：96T/48T鸡血管活性肠肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：鸡血管活性肠肽试剂盒、鸡血管活性肠肽elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
鸡免疫球蛋白M elisa试剂盒鸡免疫球蛋白M试剂盒规格型号：96T/48T鸡免疫球蛋白M试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：鸡免疫球蛋白M试剂盒、鸡免疫球蛋白M elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔一elisa试剂盒兔一试剂盒规格型号：96T/48T兔试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔试剂盒、兔一氧化lisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔子层连蛋白elisa试剂盒兔子层连蛋白试剂盒规格型号：96T/48T兔子层连蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子层连蛋白试剂盒、兔子层连蛋白elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
兔子白三烯B4 elisa试剂盒兔子白三烯B4试剂盒规格型号：96T/48T兔子白三烯B4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子白三烯B4试剂盒、兔子白三烯B4 elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒人组织相容性2-K1-K区试剂盒规格型号：96T/48T人组织相容性2-K1-K区试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人组织相容性2-K1-K区试剂盒、人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)说明书反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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文献和实验相关实验
基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础，在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是：制备DNA探针，标记探针，检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连接在dUTP上（Dig-dUTP）。用随机引物及DNA多聚
h后终止显色反应。用二甲基甲酰胺洗掉尼龙膜上的颜色后，尼龙膜可重新用于杂交。 4、应用：地高辛配基标记探针及检测试剂盒，能检测0.1pg的同源，能检测1μg哺乳动物DAN中的单拷贝基因，与放射性标记系统比较，此试剂盒能快速得到实验结果（从的标记和杂交至见到检测结果24h内能完成），而且消除了放射性的不安全问题。这试剂的灵敏度与特异性使它适用于所有的杂交技术（包括 -印迹转移，菌落杂交，噬菌斑杂交及原位杂交）以替代同位素标记和放射自显影术。 （二）试剂盒成份 1、无标记对照
gene99 美国ＫＡＰＡ的 一步法的RT-PCR试剂盒说明书见附件！或者是染料法 探针法的荧光定量试剂盒。不知道您具体是需要什么 可以加我Ｑ：５１２５８０３３１ 把说明书及我这边做的对比实验的图发给你。 qisanni05 十分感谢！我的QQ号：546483973，能不能麻烦您把您的说明书及您做的对比试验结果发我QQ邮箱里，谢谢！ king19890405 我也想知道啊，感谢回答 本文由丁香
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