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- 钦诚生物
- QC06-008
- 2025年07月12日
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1KIT
名称：人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养试剂盒
产品编号：QC06-008
二。产品简介
人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养试剂盒。包括间充质干细胞成脂分化基础培养基、人脐带间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒和油红O染色液。 本产品仅用于科研，不可用于临床治疗、诊断及其他用途。
三、主要组成成分包括
间充质干细胞成脂分化基础培养基 112mL 4℃
人脐带间充质干细胞成脂分化试剂盒 试剂A：125uL；试剂B：125uL；试剂C：125uL；试剂D：125uL；试剂E：12.5mL。 -20℃
油红O染色液 染色液A：10mL；染色液B：4mL RT
四、使用说明
1、配液前30 min左右，人脐带间充质干细胞成脂分化试剂盒中试剂A、试剂B、试剂C、试剂D和试剂E预先放置室温溶解，可短暂离心（2000g），以确保试剂能全部收集。
2、于超净台内无菌环境打开基础培养基和五种试剂的瓶/管盖。
3、将试剂A、试剂B、试剂C、试剂D和试剂E全部加入成脂分化基础培养基中。可吸取少量基础培养基洗涤各试剂管，以确保五种试剂充分利用。
4、充分混匀后即可使用。
5、油红O染色液配制：染色液A与染色液B按5:2的比例，充分混匀后，中性滤纸过滤即可使用（染色液配制后，需在两个小时内使用）。
注：本试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm滤膜）。
五、产品稳定性及保存条件
1、间充质干细胞成脂分化基础培养基置于2-8℃保存，保质期为1年；
2、人脐带间充质干细胞成脂分化试剂盒置于-20℃保存，保质期为2年；
3、完全培养基配制好后于2-8℃保存，保质期为1个月。
4、油红O染色液室温保存，保质期1年。
5、保质期内使用。
6、避免反复冻融相关产品。
六、质量控制
人脐带间充质干细胞成脂分化试剂盒已使用人脐带间充质干细胞进行性能测试。
主要的鉴定标准包括：
1、无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
2、内毒素检测
3、渗透压检测
4、pH测试
七、产品使用示例
（以六孔板为例）实验操作流程：
1、人脐带间充质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中常规培养。
2、当细胞融合度达到80-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3、将消化下来的人脐带间充质干细胞按照2×104 cells/cm2 的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4、将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5、当细胞完全融合后，小心吸弃旧培养基，加入2 mL配制好的人脐带间充质干细胞成脂分化完全培养基。
6、每隔3天换用新鲜的人脐带间充质干细胞成脂分化完全培养基。
7. 诱导2-3周左右，观察脂滴形成情况，用油红O红进行染色。
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文献和实验检测 •内毒素检测 • 霉浆菌检测 • 法定传染病检测 UltraGROTM 用于脐带间充质干细胞培养 • 脐带间充质干细胞，α-MEM • 细胞总数結果，相较于 20% Defined FBS (P3-P4) • 5% UltraGROTM 高出 3X • 平均倍增時間 25 hours
（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x103个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。（3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。（4）每三天换液，诱导2-3周。（5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色。二、成脂诱导体系：1. 试剂成脂诱导液A：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素，IBMX，地塞米松，吲哚美锌。成脂诱导液B：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛
mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中，37℃，50 mL/L CO2培养箱中孵育。（5）48 h后首次换液，弃去悬浮细胞. 随后每3天换液，1周后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L后进行流式细胞仪检测。（6）细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2周后，对成脂诱导组进行油红Ｏ脂肪颗粒染色。现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定，各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有：cd13，cd29，cd
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