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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
66
- 英文名:
5×SDS-PAGE loading buffer
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
2ml
特别提示:包括6×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:6×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
英文名称:5×SDS-PAGE loading buffer
产品货号:KFS081
产品规格:2ml
本产品作为蛋白质电泳Loading Buffer,适用于变性聚*烯酰胺凝胶电泳时的蛋白样品制备和上样。蛋白上样缓冲液是一种以溴酚蓝为染料, 6×SDS-PAGE 凝胶电泳上样缓冲液,用于常规的SDS-PAGE 蛋白电泳样品上样。
操作步骤
1. 按每5 微升蛋白样品加入1 微升6×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(6X)。
2. 100℃或沸水浴加热5 分钟,以充分变性蛋白。
3. 置冰上5 分钟,10000rpm 离心1 分钟,取上清直接上样到SDS-PAGE 胶加样孔内即可。
储存:4℃,有效期12个月。
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文献和实验一般先配制50倍的TAE缓冲液,用时再稀释成1倍的。 50倍TAE缓冲液的配制方法为 1. 称取下列试剂于1L烧杯中: Tris 242g Na2 EDTA.2H2 O 37.2g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心(3000 rpm,5 min)收集 Agarose 珠子,弃掉上清,用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。(小心吸取上清,避免触碰底部珠子) 收集沉淀,加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀,轻混均匀后煮沸 5 min,12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管,进行 Western 检测。
2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
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