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- 百奥莱博
- BTN100816-RVD
- 北京
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
206
- 英文名：
10×Alkaline Gel Buffer
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
常温
- 规格：
250mL
特别提示：包括碱性胶电泳液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：碱性胶电泳液
英文名称：10×Alkaline Gel Buffer
产品货号：BTN100816
产品规格：250mL
本品为10×的琼脂糖碱性电泳液，专门用于琼脂糖碱性变性电泳，后者主要用于分析抗核酸酶S1的DNA-RNA杂交分子DNA的大小、分析cDNA链大小、检测反转录酶合成第一条和第二条cDNA链的大小、检测分子克隆中酶的缺口活性、标定DNA缺口平移核素标记实验中试剂的用量等。
储存条件：常温运输及保存、有效期一年。
除了碱性胶电泳液,，我公司还供应以下相关产品：
名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN90317
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。
产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品*烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
产品组成：
| 成分 | 规格 | 保存 |
| 电泳级尿素 | 210g | 常温 |
| 电泳级*烯酰胺 | 77.34g | 常温 |
| 电泳级甲叉双*烯酰胺 | 2.67g | 常温 |
| 10×TBE电泳液 | 250ml | 常温 |
| 电泳级TEMED | 1.5ml | 4℃，避光 |
| 电泳级过硫酸* | 1g | 常温 |
| 2×尿素-PAGE上样液 | 1ml | -20℃ |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。
使用方法：
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(*烯酰胺：甲叉双*烯酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：
| 单链DNA长度 | zuì佳PAGE浓度 | 二*苯青FF迁移率 对应的长度 |
溴酚蓝的迁移率 对应的长度 |
| 50-400nt | 8% | 160nt | 45nt |
| 200-1000nt | 5% | 260nt | 65nt |
| 750-2000nt | 3.5% | 460nt | 100nt |
二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸*)：按每0.1 克过硫酸*干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的*烯酰胺-甲叉双*烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级*烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双*烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量*烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双*烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。*烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
| PAGE胶浓度 | 各成分用量(尿素为克，其余单位是mL) | 补水到(mL) | ||
| 尿素 | 40%AB溶液 | 10×TBE缓冲液 | ||
| 5% | 42 | 12.5 | 5.0 | 100 |
| 6% | 42 | 15.0 | 5.0 | 100 |
| 7% | 42 | 17.5 | 5.0 | 100 |
| 8% | 42 | 20.0 | 5.0 | 100 |
| 9% | 42 | 22.5 | 5.0 | 100 |
| 10% | 42 | 25.0 | 5.0 | 100 |
| 11% | 42 | 27.5 | 5.0 | 100 |
| 12% | 42 | 30.0 | 5.0 | 100 |
D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制*烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。
三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。
四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。
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文献和实验操作篇：western blot 之 SDS－PAGE 电泳
电泳篇开始 一、清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 二、灌胶与上样 1. 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。 注意：可以用 1% 琼脂糖在垂直电泳槽的左. 右和下部封边，五分钟后重复一次，这样可以保证基本不漏胶。 2. 按前面方法配 10％ 分离胶，加入 TEMED 后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用 10 ml 枪吸取 5 ml 胶沿玻璃
静置约 1 h，直至凝胶溶液完全聚合凝固，小心拔出梳子，准备上样。 上样 向电泳槽中加入电泳缓冲液，要求两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧，根据测得浓度计算的样本上样量点样（已处理好的样品，蛋白预染 Marker），保证每孔总蛋白量在 30-50 μg，确保总上样量体系小于 30 μL，注意上样时间尽量短，避免样品扩散。 电泳 上样后，盖好电泳槽的盖子，注意正负极，并选择适当的电压进行电泳。通常在不连续的系统中，上层浓缩胶的电泳电压(建议
文献对我很有启发，其中有些技术原理方面的内容如下：在含SDS缓冲液的样品中，小分子多肽的浓缩是较困难的，因为小分子多肽与SDS形成的复合体具有与SDS本身类似的电荷和大小，所以偏离了相对迁移率和分子质量对数的相互关系，因此浓缩对于小分子多肽的SDS-PAGE来说就成了一个突出问题。于是回去翻了翻自己曾经偶然跑出来的条带的模样，给我的感觉就是压缩的不好，然后还有弥散的现象（就是那种蛋白晕开的模样，例如这条带下面的波浪边缘，当然也可能是胶不均匀的原因吧，反正我当时就觉得是弥散的现象）然后我就突然有种
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