Caspase 10活性检测试剂盒

特别提示：包括Caspase 10活性检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Caspase 10活性检测试剂盒
产品货号：HR0436
产品规格：20T/50T/100T

Caspase 10活性检测试剂盒(Caspase 10 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 10酶活性或纯化的Caspase 10酶活性的试剂盒。
Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-10 是近年来发现的一类含有死亡效应结构域(dead-effector domain,DED)的蛋白酶,在结构上与Caspase 家族的另一成员Caspase-8有很高的同源性，通过形成死亡诱导信号复合物(death induced signaling complex,DISC)，激活自身蛋白酶活性，传递凋亡信号。Caspase-10的功能异常与许多疾病的发生有着密切的关系。
Caspase-10 比色法检测试剂盒提供了一种简单方便的方法检测能识别AEVD 序列的Caspases
活性。本检测技术基于酶切标记了的底物AEVD -对硝*苯*(pNA)之后对发光基团pNA 进行光谱光量测量。pNA 发射的光谱可以被分光光度计或者微量滴定板读数器在400-405 nm 出定量检测。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-10检测。储存条件：裂解缓冲液和检测液室温保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定 A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 样品适合采用 Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度接近 1-3mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase 激活比较强的时间点进行检测。
● Caspase-10 底物避光保存，使用过程中尽量避光。
● Caspase-10 底物溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集 2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入 100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上 15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
2．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 10活性检测
1．取10μl大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl caspase-10 底物(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-10水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 10活性程度。

除了Caspase 10活性检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞凋亡染色试剂盒(细胞Hoechst染色)
货号：YT118
规格：100次
本试剂盒提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡检测方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst 33258染色后，在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。典型的Hoechst 33258染色后的细胞图片参考下图。



试剂盒特点：
1. 只需25分钟即可完成细胞凋亡检测的整个过程。
2. 本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。
3. 本试剂盒对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。
4. 足够检测100个样品。

试剂盒组份：
固定液————————————50ml
Hoechst 33258染色液 —————50ml
抗荧光淬灭封片液 —————— 5ml

注意事项：
1. 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 需PBS或0.9%NaCl溶液。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
4. 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。

储存条件：4℃，有效期6个月。

名称：细胞周期检测试剂盒(微板比色法)
货号：SNM509
规格：100T|50T

名称：Annexin V-EGFP/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒
货号：SNM529
规格：50T|20T|10T

名称：TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(显色法，细胞样本)
货号：SNM535
规格：50T|20T

名称：Caspase 3荧光法检测试剂盒(AFC)
货号：KFS199
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，zuì终导致细胞凋亡。Caspase-3 荧光检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-3 剪切后，发色基团即游离出来，可通过荧光酶标仪测定其荧光强度（激发波长=485nm,发射波长=535nm）。

注意事项
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-3 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的RFU 值偏低，可以通过适当延长反应的时间，如果值还是不高，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

名称：微核分析/遗传毒性分析荧光染料
货号：KFS340
规格：10mg
微核分析/遗传毒性分析荧光染料（DAPI）是一种蓝色核酸染料，优先染dsDNA，表现为可集中结合在DNA 双链的AT 小沟，结合后的荧光会发生20 倍增强。同时，也可以结合RNA，与DNA 不同，一般认为DAPI 染料结合于RNA 的AU 区。DAPI/RNA 的复合体（500nm）有比染料与dsDNA 复合体（460nm）更长的荧光波长。DAPI 是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。他的蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针形成鲜明对比。

根据操作说明使用，染料的背景可以很低，几乎没有细胞质的背景标记。DAPI 可以用在多种实验应用中，如细胞学标记、直接或间接地基于抗体的免疫荧光分析以及mRNA 表达的原味杂交或者与特定的细胞结构荧光试剂进行共染。DAPI 也可以用来分析多色流式细胞术中。

名称：ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒
货号：QN1317
规格：20T|50T||100T
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为35.8 KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶(Propidium iodide，PI)是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将FITC-Annexin V 与PI 匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

储存条件：2～8℃，有效期一年



名称：Caspase 10活性检测试剂盒
货号：HR0436
规格：20T/50T/100T
Caspase 10活性检测试剂盒(Caspase 10 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 10酶活性或纯化的Caspase 10酶活性的试剂盒。
Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-10 是近年来发现的一类含有死亡效应结构域(dead-effector domain,DED)的蛋白酶,在结构上与Caspase 家族的另一成员Caspase-8有很高的同源性，通过形成死亡诱导信号复合物(death induced signaling complex,DISC)，激活自身蛋白酶活性，传递凋亡信号。Caspase-10的功能异常与许多疾病的发生有着密切的关系。
Caspase-10 比色法检测试剂盒提供了一种简单方便的方法检测能识别AEVD 序列的Caspases
活性。本检测技术基于酶切标记了的底物AEVD -对硝*苯*(pNA)之后对发光基团pNA 进行光谱光量测量。pNA 发射的光谱可以被分光光度计或者微量滴定板读数器在400-405 nm 出定量检测。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-10检测。储存条件：裂解缓冲液和检测液室温保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定 A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 样品适合采用 Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度接近 1-3mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase 激活比较强的时间点进行检测。
● Caspase-10 底物避光保存，使用过程中尽量避光。
● Caspase-10 底物溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集 2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入 100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上 15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
2．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 10活性检测
1．取10μl大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl caspase-10 底物(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-10水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 10活性程度。