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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
12个月
- 库存:
大量
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
50T
- 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。
- 提供阳性对照,便于分析实验结果。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
| stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
| stn 阳性对照, XXX 10E9 拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供 活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
- 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
- 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
- PCR 检测(20 μL 体系)
- 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次)

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX。
- 建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 93℃ | 5 min |
| PCR 反应 (40 个循环) |
93℃ | 35 s |
| 55℃ | 45 s |
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时,最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm, 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验Potential Zoonotic Infection of Porcine Endogenous Retrovirus in Xenotransplantation
Porcine endogenous retrovirus (PERV) is considered the major biosafety issue in xenotransplantation. Several techniques have been employed for the analysis of the PERV status in the animal donor and for the assessment of PERV transmission
指动物细胞不是因外源性感染而是在染色体组上保持着的病毒(Retrovirus中的 provirus)时,此病毒即称为内源性病毒。此类病毒多呈不显性感染。内源性病毒为什么存在于生殖细胞内或开始就是动物所具有的病毒的原始型?现在都还不清楚。原始病毒是通过精子和卵来遗传的,其遗传基因的发生被调节而分成若干个。根据其发生的状态,表现为产生细胞性辅助因子(例如鸡的辅助者因子 CHF)、产生致肿瘤 RNA病毒的族特异性抗原( gs抗原),全部发生时则产生病毒等各种各样的状态。在小白鼠身上发生时多引起
DETECTION OF ß-GALACTOSIDASE AND ALKALINE PHOSPHATASE ACTIVITIES IN TISSUE
encoded enzyme can be overfixed. Fixation with 0.5% glutaraldehyde gives superior staining relative to paraformaldehyde fixation, but can also preserve endogenous enzyme activity to the point where the signal from endogenous activity is confounding
技术资料暂无技术资料 索取技术资料








