柱式昆虫DNAout

本产品是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组 织中提取基因组 DNA 的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下，特 异地跟基因组 DNA 结合形成沉淀，然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到 DNA。本产品具有下列特点：
1. 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物，包括昆虫、节肢动物、 蛔虫、扁形虫等。
2. 除新鲜样品外，还适合于各种保存状态的样品，包括冷冻的样品、用乙醇保存 的样品和福尔马林保存的样品。
3. 提取到的基因组 DNA 完整性，长度一般在 20-50 Kb。
4. DNA 纯净，OD260/280 一般都在 1.8 左右，可直接用于 PCR、酶切、杂交 等。
5. 操作简单，整个过程约 30 分钟。
6. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
使用方法
1. 称取 0.1-0.3 g 昆虫样品转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净 的 1.5 mL 塑料离心管中。 注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为 DNA 会吸附在表面，影响得 率。
2. 在离心管中加入 1 mL 65℃预热的溶液 A 并用移液枪头充分吹打混匀（如果溶 液 A 有沉淀，需先在 65℃加热溶解后摇匀再使用）。
3. 65℃保温 5-30 分钟，其间最好吹打混匀 2-3 次。
4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟。
5. 将不超过 0.75 mL 的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小 悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀，溶液将呈白色混浊 状。
7. 将其置于冰浴中放置 5-10 分钟。
8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新的 1.5 mL 塑料离心管中。
9. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。
10. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清 到新 1.5-5mL 塑料离心管中。注意：由于下一步要加 1.5 倍体积的溶液 C，所 以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入 1.5 倍体积的溶液 C，上下颠倒 30 秒混匀，然后分多次的将混合液转移到 离心吸附柱中。
12. 每次转移 0.7-0.8 mL 混合液后，室温放置 5-10 分钟。
13. 12000-15000 g 室温 1 分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第 12-14 步的操作。
15. 将 0.7 mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心 1 分钟，弃穿透液。
16. 在离心吸附柱中加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000 g 离心半分钟（此 步为第二次洗涤）。
17. 空甩 1 分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 30-100 uL DNA 洗脱液 2.0。
19. 室温放置 5 分钟后离心 1 分钟，管底即为昆虫 DNA 溶液，可立即使用，也可 长期保存在－20℃。 20. 可以重复上步一次，以洗脱更多的 DNA。