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柱式粪便DNAout

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  • ¥990
  • 钦诚生物
  • QC80102
  • 上海
  • 2025年07月12日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保质期

      一年

    • 供应商

      钦诚生物

    • 保存条件

      室温

    • 规格

      50次

    本产品是动物粪便 DNAout的柱式升级产品,专门用于从各种 动物粪便中快速提取高质量的 DNA。跟动物粪便 DNAout,它具有下列特点:
    1. 操作更加简单快速,一个样品只需要十多分钟的时间。
    2. DNA 更加纯净,OD260/280 一般都在 1.8 以上,得到的 DNA 样品原液或稀 释液可以直接用于 PCR 扩增。
    3. 每次微量提取可以处理 100-300mg 左右的样品,能得到 5 ug 左右 DNA,片 段长度在 30 Kb 左右。
    4. 可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的 DNA。
    5. 试剂无毒无害, 环保。
    使用方法
    1. 65℃预热溶液 A,待其沉淀溶化后充分混匀,取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料 离心管中并放置于 65℃待用。
    2. 称取 0.1-0.3 g 的粪便,加入到含预热溶液 A 的离心管中,震荡器上剧烈震荡 5-10 分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一 种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到 1.5 mL 离心管中。注意:不论使 用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。
    3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。
    4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈 淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为 300-400 µL)。
    5. 在上清液中加入等体积的溶液 B,上下颠倒 30 秒充分混匀,溶液将呈白色或 淡黄色混浊状。
    6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。
    7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,转移上清到新的 1.5 mL 离心管中,上清 液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡,体积在 0.7 mL 左右。 注意:下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略,直接进入第 10 步,但 DNA 的 产量会低 50%左右,OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步,则转移的 溶液体积不要超过 0.6 mL,否则没有空间加溶液 C。
    8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备),震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底 的溶液震荡起来。
    9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,小心转移上清到新离心管中。说明:离心 后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将 0.5 mL 上清转移到新的 1.5 mL 离心管中。如果有多余的可以弃之不用。
    10. 加入 0.8 mL 的溶液 C,上下颠倒 30 秒混匀。
    11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温 离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液)。
    12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃 穿透液。
    13. 如果有必要,可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的 DNA 的纯度稍有 提高,但产量稍微有所降低。
    14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液 会污染 DNA。
    15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 50-100 uL DNA 洗 脱液 2.0。
    16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。
    17. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 DNA 样品,可以立即使 用或存放于冰箱待用。

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