- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC0335
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 别名: | pHH-43 |
|---|---|
| 复制子: | colE1 ori |
| 质粒分类: | 大肠杆菌菌蜕制备质粒 |
| 原核抗性: | 氯霉素Chloramphenicol |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 30℃，有氧，LB |
质粒简介
pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影，那段基因的酶切位点是kpn i和EcoR V，由于含有E裂解基因，超过38度就可以引发，所以培养最好30度左右。
质粒图谱
pHH43菌蜕制备质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pHH43菌蜕制备质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验的突变。 通过 PCR 进行基因分型也是对癌症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。 3.分子克隆 PCR 被广泛应用于目标 DNA 片段的克隆，该技术被称为 PCR 克隆。在直接 PCR 克隆中，DNA（如，gDNA、cDNA、质粒 DNA）的目标区域被扩增并插入到特殊设计的兼容载体中。 图 4.PCR 克隆：通过 PCR 制备的插入片段被克隆到兼容载体中。（A） 直接 PCR 克隆技术包括 TA 和平端克隆。（B）间接 PCR 克隆，扩增子可在插入到兼容载体之前被修饰，如进行限制
骨髓细胞，病毒DNA插入宿主细胞基因组，基因的活性得到表达。这时，由于骨髓细胞里面没有辅助病毒，所以整合进宿主基因组的逆转录病毒，不再有外壳蛋白可供包装，因此也就无法增殖，而只能被“陷”在宿主基因组中，通过细胞分裂而传给下一代子细胞。三、柯斯质粒 1978年Collins和Hohn构建一种新型的大肠杆菌克隆载体，命名为cosmid（柯斯质粒）。它是用正常的质粒同噬菌体λ的cos位点构成。例如，柯斯质粒pHC79系由质粒pBR322和噬菌体λ的cos位点的一段DNA构成（图23-5），全长43.kb。在包装
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。 B834 为 BL21 的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型，可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，从而用于结晶学研究。 BL21 应用最广的宿主菌来源，具有 lon
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