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- 钦诚生物
- 上海
- QC0230
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 启动子: | T7,ADH1 |
|---|---|
| 复制子: | 2μ ori,ori,FI ori |
| 质粒分类: | 酵母系列，酵母双杂交载体 |
| 质粒大小: | 7.9kb |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | TRP1 |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧 LB |
| 表达宿主: | 酵母细胞 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒简介
pGBKT7-Lam is a negative control plasmid that encodes a fusionof the human lamin C protein (a.a. 66–230) and the GAL4 DNA-BD (a.a. 1–147). The lamin C cDNA insert (GenBank Accession #M13451) was derived from the plasmid referenced in Bartel et al. (1993a). Plasmid modification was performed atBD Biosciences Clontech. Yeast cotransformed with pGBKT7-Lam and pGADT7-RecT, provide a measure of the backgroundthat is due to false-positive two-hybrid interactions. pGBKT7-Lam has not been sequenced.
质粒图谱
pGBKT7-lam酵母双杂交质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pGBKT7-lam酵母双杂交质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框，正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体 ( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒 分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7，构建成表达载体 pGBKT-CaM，转化大肠杆菌DH5&alpha
相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框，正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7，构建成表达载体pGBKT-CaM，转化大肠杆菌 DH5α。 ⑥
开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！ 在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。 今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的KIT 1，GOLD系统式对系统3的升级版，替换了一个报告
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