pPinkα-HC毕赤酵母质粒

基本信息

启动子:    PpADE2 HC，AOX1
复制子:    pUC ori
终止子:    CYC1
质粒分类:    酵母系列，毕赤酵母表达载体
质粒大小:    7898bp
原核抗性:    Amp
筛选标记:    ADE2
克隆菌株:    DH5α
培养条件:    37℃，有氧 LB
表达宿主:    酵母细胞
5'测序引物:    AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC
3'测序引物:    AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

质粒简介

    The PichiaPink™ Secreted Vector Kit contains the pPINKα-HC vector for use with the PichiaPink™ Yeast Expression System. The pPINKα-HC vector is built around the ADE2 gene for complementing the complementing the ade2 deletion in the PichiaPink™ strains. The pPINKα-HC vector has the α-mating factor secretion signal sequence so that all proteins are secreted. You can order the PichiaPink™ Secreted Vector Kit to refill your PichiaPink™ Yeast Expression System Kit.

质粒图谱


 

pPinkα-HC毕赤酵母质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pPinkα-HC毕赤酵母质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。