pCL-Ampho逆转录包装质粒

质粒简介

      The pCL-Ampho packaging vector is a part of the RetroMax expression system (Cat#10040K) and has been designed to maximize recombinant–retrovirus titers in a simple, efficient, and flexible experimental system. By introducing a retroviral vector into a cell expressing retroviral proteins, retroviral particles (virions) are shed into the culture medium at the rate of 1 infectious particle/cell/day. Retrovirus tropism is determined at three levels. The first is simply a function of viral envelope protein, gp70. The envelope determines which cells the virus will enter. gp70 comes in three different flavors for gene therapy. The plasmid DNA can be amplified by transforming bacteria and growing them on LB/ampicillin (100 mg/ml) media.

质粒图谱

 
 
pCL-Ampho逆转录包装质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pCL-Ampho逆转录包装质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。