pTRE3G哺乳调控质粒

pTRE3G哺乳调控质粒

基本信息

启动子: TRE3G
复制子: pUC ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 哺乳细胞，四环素调控系统载体
质粒大小: 3431bp
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 四环素诱导
5'测序引物: 根据序列设计引物
3'测序引物: 根据序列设计引物

质粒简介
PTRE3G é um sistema de células de mamíferos, a tetraciclina FOI resistente a ampicilina prokaryotic promoter, que é portador de TRE3G, tamanho 3431bp.

 
质粒图谱
 
 
质粒序列

LOCUS       Exported                3431 bp ds-DNA     circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 5
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3431)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3431
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        4..382
                     /note="TRE3G promoter"
                     /note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be 
                     activated by binding of Tet-On(R) 3G"
     protein_bind    12..30
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    48..66
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    84..102
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    120..138
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    156..174
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    192..210
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     protein_bind    228..246
                     /gene="tetO"
                     /bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
                     /note="tet operator"
                     /note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
     intron          583..648
                     /note="small t intron"
                     /note="simian virus 40 (SV40) small t antigen intron"
     CDS             778..798
                     /codon_start=1
                     /product="nuclear localization signal of SV40 large T 
                     antigen"
                     /note="SV40 NLS"
                     /translation="PKKKRKV"
     polyA_signal    1223..1344
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1601..2189)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2360..3220)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3221..3325)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 ctcgagttta ctccctatca gtgatagaga acgtatgaag agtttactcc ctatcagtga
       61 tagagaacgt atgcagactt tactccctat cagtgataga gaacgtataa ggagtttact
      121 ccctatcagt gatagagaac gtatgaccag tttactccct atcagtgata gagaacgtat
      181 ctacagttta ctccctatca gtgatagaga acgtatatcc agtttactcc ctatcagtga
      241 tagagaacgt ataagcttta ggcgtgtacg gtgggcgcct ataaaagcag agctcgttta
      301 gtgaaccgtc agatcgcctg gagcaattcc acaacacttt tgtcttatac caactttccg
      361 taccacttcc taccctcgta aagtcgacac cggggcccag atctatcgat cggccggata
      421 tcacgcgtca tatggctagc ctgcagggat ccaatgtaac tgtattcagc gatgacgaaa
      481 ttcttagcta ttgtaatact ctagaggatc tttgtgaagg aaccttactt ctgtggtgtg
      541 acataattgg acaaactacc tacagagatt taaagctcta aggtaaatat aaaattttta
      601 agtgtataat gtgttaaact actgattcta attgtttgtg tattttagat tccaacctat
      661 ggaactgatg aatgggagca gtggtggaat gcctttaatg aggaaaacct gttttgctca
      721 gaagaaatgc catctagtga tgatgaggct actgctgact ctcaacattc tactcctcca
      781 aaaaagaaga gaaaggtaga agaccccaag gactttcctt cagaattgct aagttttttg
      841 agtcatgctg tgtttagtaa tagaactctt gcttgctttg ctatttacac cacaaaggaa
      901 aaagctgcac tgctatacaa gaaaattatg gaaaaatatt ctgtaacctt tataagtagg
      961 cataacagtt ataatcataa catactgttt tttcttactc cacacaggca tagagtgtct
     1021 gctattaata actatgctca aaaattgtgt acctttagct ttttaatttg taaaggggtt
     1081 aataaggaat atttgatgta tagtgccttg actagagatc ataatcagcc ataccacatt
     1141 tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa
     1201 aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag
     1261 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt
     1321 gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgcggctct agagctgcat taatgaatcg
     1381 gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg
     1441 actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa
     1501 tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc
     1561 aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc
     1621 ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat
     1681 aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc
     1741 cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct
     1801 cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg
     1861 aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc
     1921 cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga
     1981 ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa
     2041 gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta
     2101 gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc
     2161 agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg
     2221 acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga
     2281 tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg
     2341 agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct
     2401 gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt gtagataact acgatacggg
     2461 agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg agacccacgc tcaccggctc
     2521 cagatttatc agcaataaac cagccagccg gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa
     2581 ctttatccgc ctccatccag tctattaatt gttgccggga agctagagta agtagttcgc
     2641 cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt
     2701 cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc
     2761 ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt
     2821 tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc
     2881 catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt
     2941 gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata
     3001 gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga
     3061 tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag
     3121 catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa
     3181 aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt
     3241 attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga
     3301 aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag
     3361 aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc
     3421 ttcaagaatt c
//

pTRE3G哺乳调控质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pTRE3G哺乳调控质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。