- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC5109
- 2025年07月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 别名: | Plasmid #52970 |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | LB/37℃ |
质粒图谱
FokI-dCas9哺乳编辑质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
FokI-dCas9哺乳编辑质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验引起插入或缺失突变。因此大幅度降低了脱靶效应。 9z47wt_small.jpg" style="width: 585px; height: 178px;"/> 其次，将 dCas9 蛋白与 FokI 进行融合，与 ZFNs 和 TALENs 类似，一对 sgRNA 引导 dCas9-FokI 到临近的两个靶点上，当 FokI 蛋白形成二聚体时，Cas9 蛋白才会产生 DSB，而 FokI 单体存在时，dCas9-FokI 不具有切割活性。 最后，在不牺牲特异
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